Avances en la investigación láctea
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo de “Nivel de campo” Ensayo cromogénico para la detección de aflatoxina M1 en la leche

Neelam Verma, Namita Ashish Singh, Naresh Kumar, Vinai Kumar Singh y HV Raghu

De dieciocho Bacillus spp. examinado para determinar la sensibilidad a la aflatoxina M1 (AFM1) Bacillus brevis MTCC 3136 resultó ser el más sensible, seguido de B. megaterium ATCC 9885 a 0,5 ppb (límite del Codex). Bacillus brevis 3136 se encontró débilmente positivo para la actividad de la lipasa mientras que B. megaterium 9885 mostró una actividad de acetil esterasa significativa. La máxima esporulación se logró en agar de esporulación de Arret y Krishbaum (90,63 %), seguido de caldo de extracto de levadura con triptona, caldo de extracto de levadura con triptona glucosa, medio mínimo y medio de sal de sacarosa. Se ha desarrollado un ensayo cromogénico a nivel de campo para AFM1 en leche utilizando esporas de B. megaterium 9885 cultivadas en agar de esporulación Arret y Krishbaum. Se añadieron esporas con leche que contenía germinantes (dextrosa, sacarosa, triptona) y sustrato cromogénico seguido de incubación a 37°C durante 75 ±C. 5 minutos. El cambio de color de incoloro a azul cielo en 75 ± 5 min es una indicación de la germinación de esporas seguida de la liberación de la enzima y su acción sobre el sustrato cromogénico. Sin embargo, ningún cambio de color indica que la leche es positiva para AFM1 a 0,5 ppb. El ensayo desarrollado se validó con leches crudas, pasteurizadas y en polvo con una correlación del 96 % al compararlo con el radioinmunoensayo, es decir, el ensayo Charm 6602. La fiabilidad del ensayo también se ha comprobado añadiendo AFM1 a la leche. El ensayo desarrollado también fue validado por materiales de referencia certificados de metales pesados y pesticidas para verificar la reactividad cruzada de estos con nuestro ensayo desarrollado. El ensayo cromogénico desarrollado es rentable, portátil, sin interferencia de antibióticos,
detergentes, sanitizantes, metales pesados y pesticidas. El ensayo desarrollado se puede utilizar en granjas lecheras y laboratorios con menos recursos para la detección de AFM1 en la leche.