Revista de Nutrición y Ciencias de la Alimentación
Acceso abierto

abstracto

Plataforma de inmunoensayo para antígenos de caseína en fórmula infantil a base de caseína hidrolizada

G. Christopher Butler, Michael B Miklus, Cynthia M Barber, Steven M Tennyson y Pedro A Prieto

Las fórmulas hipoalergénicas son la única fuente de nutrición para los bebés que son alérgicos a las proteínas de la leche o que corren el riesgo de desarrollar alergias. Las estrategias para proporcionar sustento nutricional, mientras se previenen las reacciones alérgicas, incluyen el diseño de fórmulas basadas en caseína ampliamente hidrolizada que presumiblemente carece de epítopos antigénicos. Los ensayos dedicados a la evaluación de motivos proteicos antigénicos son cruciales para verificar la ausencia de antígenos relevantes en las fórmulas y las materias primas utilizadas en su preparación. La evaluación de los kits comerciales de inmunoensayo destinados a la detección de proteínas de la leche en los alimentos llevó a la conclusión de que era necesario un ensayo específico para fórmulas a base de caseína ampliamente hidrolizada para mejorar la recuperación de alérgenos y la consistencia del ensayo. El propósito de esta investigación fue desarrollar una ruta reproducible, desde la generación de anticuerpos hasta la pre-validación de inmunoensayos optimizados para el análisis de fórmulas infantiles a base de caseína hidrolizada. Preparamos antisueros purificados de ovejas inmunizadas con caseína precipitada con ácido bovino para establecer una plataforma que consiste en un inmunoensayo de transferencia de ranura y un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. Los resultados indican que las ovejas pueden producir de forma fiable anticuerpos contra epítopos en la fracción de caseína de la leche bovina, proporcionando así un reactivo cuantitativo que se une a la caseína inmovilizada en diferentes formatos. Los límites de detección y cuantificación de las soluciones estándar para el inmunoensayo ligado a enzimas fueron de 0,8 y 2,5 ppm, respectivamente. El límite de detección en la fórmula a base de caseína ampliamente hidrolizada fue de 0,5 ppm y el límite de cuantificación de 1,4 ppm. Esta cuenta describe dos inmunoensayos reproducibles que son accesibles para cualquier laboratorio o entorno de fabricación y no requieren ingredientes patentados o soluciones de extracción no reveladas. Si bien estas pruebas se desarrollaron para cuantificar la caseína en matrices de fórmulas hipoalergénicas, en el presente informe también se describe una aplicación del inmunoensayo de transferencia de ranura para evaluar la caseína residual en las superficies de fabricación.