Revista de síndrome de Down y anomalías cromosómicas
Acceso abierto

abstracto

Protocolo eficiente de extracción de ADN para el genotipado de polimorfismos de un solo nucleótido en el síndrome de Down

Hazel N Barboza, Joissy Aprégio, Carolina Felix Araujo, Marcia G Ribeiro, Marcelo A Costa Lima, Thereza Quirico-Santos and Marcia R Amorim

La recolección de células epiteliales bucales derivadas de la saliva ha sido una fuente alternativa para obtener ADN humano, especialmente de recién nacidos y pacientes con discapacidades mentales. Voluntarios sanos sin antecedentes de enfermedades genéticas o neurológicas se incluyeron como control para establecer las condiciones adecuadas para la extracción, almacenamiento y genotipado del ADN. El grupo de estudio estuvo formado por 100 niños con síndrome de Down (SD), 50 con dificultades motrices orales. Se utilizó un procedimiento de hisopo bucal y/o enjuague bucal antes del cepillado de dientes para obtener ADN genómico de alta calidad para la detección de polimorfismos genéticos mediante PCR convencional y en tiempo real. La comparación de diferentes métodos mostró que el rendimiento promedio de ADN del enjuague bucal fue de 343 ng/μl (rango 233-468 ng/μl) y de hisopos fue de 94 ng/μL (rango 32-260 ng/μL). El protocolo optimizado produjo muestras de alta calidad que permitieron el análisis de los polimorfismos MTHFR c.677C>T y MTRR c.66A>G mediante PCR convencional y en tiempo real. La extracción de ADN genómico de las células epiteliales bucales demostró ser una estrategia confiable, simple, económica y no invasiva para la evaluación de rutina de las variaciones genéticas en pacientes con síndrome de Down.