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abstracto

Ecto-Cyclic AMP Independent Protein Kinase-A Potente regulador del canal de calcio tipo L y la motilidad hacia adelante de los espermatozoides del epidídimo de cabra (Capra indicus)

Debjani Nath y Mithun Shaw

Objetivo: Los espermatozoides caprinos (Capra indicus) poseen una nueva proteína quinasa independiente de ecto-cAMP (ecto-CIK) en la superficie de su membrana. Esta enzima mostró una notable alteración a través del proceso de maduración de los espermatozoides en el epidídimo. Investigamos el papel de CIK en la regulación de la motilidad hacia adelante de los espermatozoides del epidídimo mediante el control del nivel intracelular de [Ca2+].
Método: Se trataron espermatozoides maduros del epidídimo caudal con anticuerpo CIK y se observó una inhibición máxima de la actividad enzimática (85 %) a los 120 minutos de exposición. Para analizar los mecanismos de absorción de calcio, las células se expusieron a 45Ca2+ después del tratamiento con el anticuerpo CIK y se trataron previamente con diferentes reguladores de los canales de calcio. La señal de [Ca2+]i intracelular se determinó fluorométricamente usando fura 2-AM. Se utilizó el método de ensayo espectrofotométrico computarizado para medir el porcentaje de motilidad hacia adelante.
Resultado: se demostró que la captación de calcio a través de los canales de Ca2+ dependientes de voltaje de tipo L de la membrana plasmática está regulada por CIK. El pretratamiento de los espermatozoides con varapamilo (20 µM), nifedipina (20 µM) inhibió significativamente el aumento de [Ca2+]i intracelular inducido por el anticuerpo CIK. Mientras que los antagonistas de la calmodulina, la trifluoperazina y el clorhidrato de w13 (N-(4-aminobutil)-5-cloro-2 naftalenosulfonamida y la azida de sodio, un potente inhibidor mitocondrial, no mostraron ningún efecto sobre esta entrada de calcio. El tratamiento con el ionóforo de calcio A123187 del anticuerpo CIK tratado las células mostraron un aumento de la captación de calcio insensible a los inhibidores del canal. Se observó que el verapamilo (20 µM) tiene un papel importante en la disminución (~50 %) de la motilidad hacia delante de los espermatozoides tratados con anticuerpos CIK.
Conclusión: Llegamos a la conclusión de que CIK es un regulador importante de la motilidad hacia adelante en los espermatozoides del epidídimo y que la regulación puede activarse en parte por el nivel de [Ca2+]i intracelular, cuya extensión es impartida funcionalmente por el L activado por voltaje tipo canal de calcio.