Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Desarrollo de microesferas de SiO2 mesoporosas magnéticas de núcleo-carcasa para la inmovilización de tripsina para la digestión rápida de proteínas

Dawei Qi, Yonghui Deng, Yingchao Liu, Huaqing Lin, Chunhui Deng, Yan Li, Xiangmin Zhang, Pengyuan Yang y Dongyuan Zhao

En el trabajo, desarrollamos un núcleo de Fe3O4@SiO2 modificado con glicidoxipropiltrimetoxisilano(GLYMO) y alineado perpendicularmente La cubierta mesoporosa de SiO2 (designada como Fe3O4@nSiO2@mSiO2) como sustrato novedoso para la inmovilización de una gran cantidad de tripsina y la aplicó para una digestión rápida de proteínas. En primer lugar, se sintetizaron microesferas de Fe3O4@nSiO2@mSiO2. Luego, la superficie de las microesferas se funcionalizó con GLYMO para la inmovilización de enzimas. La cantidad de tripsina inmovilizada en Fe3O4@nSiO2@mSiO2 fue de aproximadamente 188 ? g/mg, que era mucho más que en los materiales magnéticos anteriores. Utilizando las microesferas de SiO2 mesoporosas magnéticas inmovilizadas con tripsina, las proteínas de las muestras se digirieron rápidamente con irradiación de microondas. La eficacia de esta técnica para el mapeo de proteínas se demostró mediante el análisis espectral de masas de la fragmentación peptídica de tres proteínas estándar, incluido el citocromo c (Cyt-c), la mioglobina (MYG) y la albúmina de suero bovino (BSA). Las microesferas magnéticas funcionalizadas sirvieron no solo como sustrato para la inmovilización de enzimas, sino también como excelentes absorbentes de microondas, lo que mejoró enormemente la eficiencia de la digestión de proteínas. También vale la pena señalar que al utilizar este enfoque novedoso, la proteína se puede digerir de manera efectiva en segundos, en contraste con las horas requeridas por los métodos convencionales. Además, las microesferas de SiO2 mesoporosas magnéticas inmovilizadas con tripsina exhiben una mejor estabilidad que los métodos convencionales. Además, se demostró la viabilidad de utilizar esta novedosa estrategia para el análisis de muestras reales aplicándola al análisis de extracción de hipófisis humana, lo que abre una vía para su posterior aplicación en análisis proteómicos a gran escala.