Revista de Probióticos y Salud
Acceso abierto

abstracto

Integridad de la pared celular y formación de protoplastos del probiótico Lactobacillus acidophilus mediante tinción fluorescente y microscopía de fluorescencia

Página de Ryan, David Burk, Kayanush Aryana

La identificación de protoplastos de células bacterianas ha utilizado previamente microscopía de contraste de fase. Este método determina el protoplasto por su tamaño y cambio de forma. Se puede usar un método más verificable utilizando fluorescentes tinciones que se dirigen a los componentes celulares específicos. El objetivo de este estudio fue utilizar microscopía de fluorescencia técnicas para determinar la presencia o ausencia de paredes celulares bacterianas en el probiótico Lactobacillus acidophilus, tras exposición a las enzimas digestivas de la pared celular. Las células bacterianas se trataron con diferentes concentraciones de lisozima [0, 175, 250, 425 µg/ml] y se incubaron a 37°C durante diez minutos. Después del tratamiento con lisozima, las células se tornaron fluorescentes. teñido con diferentes concentraciones (1x, 2x, 10x y 100x) de dos colorantes fluorescentes, aglutinina de germen de trigo (WGA) y Hoechst 33342. El WGA [CF^®594 WGA, un tinte rojo fluorescente] se usó para unirse selectivamente a los residuos del capa de peptidoglicano de la pared celular y Hoechst 33342, un tinte fluorescente azul, se usó para unirse específicamente a ácidos nucleicos de ADN de doble cadena de células bacterianas. El método estándar para la preparación de muestras para Se siguió microscopía de fluorescencia. Se estudiaron tres campos para cada combinación de lisozima y tinción. unidireccional Se realizó ANOVA para determinar las diferencias en las concentraciones de lisozima. Un valor p < 0,05 se anotó como significativamente diferente. La integridad estructural de la pared celular comenzó a deteriorarse a 175 y 250 µg/ml de lisozima y célula. la lisis y las estriaciones del ADN aumentaron a una concentración de 425 µg/ml. Concentración de lisozima de 175 µg/ml produjo un promedio de 41% de protoplastos o digestión parcial de la pared celular. Un aumento de 175 a 250 µg/ml La concentración de lisozima resultó en una disminución del porcentaje promedio de protoplastos (4%). A una concentración de 425 μg/ml, el porcentaje promedio de protoplastos disminuyó al 1%, mientras que también mostró un aumento en las estrías de ADN. En 1x concentración de colorante, se observó tinción parcial de la pared celular. A 2x, la tinción completa de la pared celular fue grabado. A 10x, se observó una tinción completa de la pared celular y los núcleos similar a las concentraciones de tinte a 2x sin saturación significativa de colorantes. La concentración de tinte a 100x produjo una sobresaturación de los tintes en la pared celular y núcleos que hacen que se mezclen e inhiban la eficacia de identificar células bacterianas y protoplastos. 2x fue más óptimo para la tinción completa de la pared celular y el núcleo. Se observó ruido de fluorescencia de fondo como concentración de colorante aumentada. En Lactobacillus acidophilus, una concentración de lisozima de 175 µg/ml fue suficiente para digestión de la pared celular. La eficacia de la concentración de tinte fue mejor a 2x con la menor cantidad de ruido de fondo.