Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Un análisis de N-glicosilación de alfa-2-macroglobulina humana utilizando un enfoque integrado

Zhenxin Lin, Andy Lo, Diane M. Simeone, Mack T. Ruffin y David M. Lubman

La asignación de sitios de glicosilación y la microheterogeneidad del sitio tiene importancia tanto biológica como clínica. En este documento, se estudió el patrón detallado de N-glicosilación de la alfa-2-macroglobulina sérica humana utilizando un enfoque integrador, que incluye la permetilación de N-glicanos, la disociación inducida por colisión (CID) y la disociación por transferencia de electrones (ETD) de N-glicopéptidos quimotrípticos, y desglicosilación parcial de N-glicopéptidos quimotrípticos con endo-β-N-acetilglucosaminidasa F3 (Endo F3). Se encontró que tres sitios de N-glicosilación estaban ocupados por cuatro N-glicanos de tipo complejo biantenario usando análisis de N-glicanos y el método ETD/CID. El análisis espectrométrico de masas asistido por Endo F3 produjo cinco sitios de N-glicosilación con y sin fucosilación central. En total, seis de los ocho sitios potenciales de N-glicosilación se identificaron utilizando este enfoque. Este enfoque integrador se realizó usando solo 10 μL de suero humano tanto para la asignación del sitio de N-glicosilación como para la determinación de la microheterogeneidad del sitio.