Revista de Oftalmología Clínica y Experimental
Acceso abierto

abstracto

Un método de tinción dual para distinguir los vasos retinianos en un modelo de retinopatía inducida por oxígeno (OIR)

Ling Xu, Ping Hu, Ye Zhang, Jinyi Long, Xue Wu, Yuhong Ye, Ning Cui, Fei Sun, Xinmin Lu, Jikui Shen, Da Long

Objetivo: El objetivo de este estudio fue mejorar un método que ahorre tiempo, dinero y mano de obra para distinguir los vasos estructurales de la retina, las áreas de neovascularización (NV) y de no perfusión (NP) en ratones con retinopatía inducida por oxígeno (OIR).

Métodos: Se expusieron ratones C57BL/6J a condiciones hiperóxicas (75% ± 2% O ₂ ) desde el día 7 posnatal (P7) hasta el P12 y luego se los devolvió al aire ambiente para provocar la máxima neovascularización retiniana (NV). Después de aislar las retinas en P17, los montajes completos de retina se tiñeron sucesivamente con Griffonia Simplicifolia Lectin (GSL) IB4-594 y GSL IB4-FITC utilizando métodos de tinción que controlan el tiempo y la concentración. Este método mejorado solo utilizó dos medios de tinción y no se requirieron otros medios de bloqueo. Las imágenes se adquirieron mediante microscopía de fluorescencia y se fusionaron con Adobe Photoshop. El área de neovascularización retiniana y el área de no perfusión se midieron con Image-Pro Plus.

Resultados: La tinción con una concentración de GSL IB4-594 de 1:100 durante 45 minutos permitió teñir casi por completo todos los mechones neovasculares, lo que permitió evaluar el estado confiable y consistente de la neovascularización retiniana. Mientras tanto, las preparaciones retinianas completas OIR se tiñeron con una concentración de GSL IB4-FITC de 1:100 durante la noche, seguida de la tinción con GSL IB4-594, lo que permitió una fácil identificación y cuantificación de las áreas de no perfusión retiniana, los vasos estructurales y los mechones neovasculares en los ratones OIR.

Conclusión: El uso de una tinción dual de retina reproducible y cuantificable para evaluar la NV y la NP en el modelo OIR demuestra la importancia de un método de tinción apropiado que pueda calcular fácilmente la relación de NV y NP. Otros resultados, como la evaluación de la eficacia antiangiogénica de péptidos biespecíficos para la antiangiogénesis obtenidos mediante este método, sugieren un mayor valor clínico y científico de la investigación de que la relación de NV y NP se puede identificar fácilmente mediante el uso de tinción dual de retina.