Revista de Nutrición y Ciencias de la Alimentación
Acceso abierto

abstracto

Validación de un método Elisa competitivo en matrices enzimáticas suplementarias

Susanne Siebeneicher, John Deaton y Anamaria Cuentas

Introducción: Las enzimas suplementarias se utilizan cada vez más en la industria alimentaria. En consecuencia, también deben analizarse para detectar gluten debido a razones de etiquetado para que los fabricantes de alimentos brinden detección de alérgenos alimentarios. El gluten se analiza usando un Sandwich ELISA usando el anticuerpo R5. Sin embargo, los ELISA sándwich no son adecuados para el análisis de gluten fragmentado ya que la detección se basa en el tamaño de los fragmentos. Como resultado, se han implementado ELISA R5 competitivos para su uso. Cuando se utiliza un ELISA competitivo para analizar enzimas sin gluten, los resultados de contaminación por gluten son muy altos y se desconoce su causa. Se ha sugerido que las enzimas destruyen los anticuerpos del formato de prueba y por lo tanto se obtienen resultados falsos positivos. Este estudio tuvo como objetivo investigar si el ELISA competitivo se puede utilizar para el análisis de gluten en enzimas suplementarias mediante la adaptación del método de extracción.
Métodos: Las soluciones enzimáticas se enriquecieron con concentraciones conocidas de gluten y luego se analizaron para determinar el contenido de gluten utilizando kits ELISA tipo sándwich y kits ELISA de la competencia según las instrucciones del fabricante. Se inactivaron muestras de enzimas adicionales elevando la temperatura de extracción a 100 °C para inactivar las enzimas y también se analizaron con kits ELISA tipo sándwich y de la competencia.
Resultados: Las enzimas se enriquecieron con gluten y se analizaron con dos ELISA diferentes y mostraron resultados falsos negativos con el ELISA sándwich y resultados falsos positivos con el ELISA competitivo. Los experimentos de preincubación mostraron que las enzimas destruyeron el anticuerpo utilizado en el ELISA competitivo. Por otro lado, los extractos extraídos a 100°C no mostraron ese efecto.
Conclusión: En conclusión, los kits ELISA competitivos se pueden usar para probar productos de fermentación como enzimas cuando se usa el método de extracción adaptado. Los experimentos de enriquecimiento mostraron claramente una buena recuperación de gluten en el ELISA competitivo con la extracción modificada, lo que demuestra que el paso de ebullición no afecta el contenido de gluten existente en las muestras. Este método se puede utilizar para enzimas suplementarias para el análisis del contenido de gluten en dichos productos.