Revista de leucemia
Acceso abierto

abstracto

Utilización de secuenciación profunda de próxima generación para analizar la mutación del dominio quinasa BCR-ABL1 en pacientes con leucemia mieloide crónica resistente a imatinib en Vietnam

Duong CQ, Nguyen C, Nguyen TT, Nguyen LV, Pham HQ, Trinh HTT, Tran HC, Le TQ, Pham HT, Hong TH, Nguyen TH, Truong HN, Bach KQ y Nguyen TA

Antecedentes: la leucemia mieloide crónica es una neoplasia mieloproliferativa clonal, caracterizada por la presencia de translocación cromosómica t (9; 22)(q34; q11). Esto se encuentra en más del 95% de los casos y da como resultado la proteína de fusión BCR-ABL1 con alta actividad de tirosina quinasa. Durante las últimas décadas, el imatinib y otras generaciones de inhibidores de la tirosina cinasa se han utilizado con eficacia para la terapia diana de la enfermedad. Sin embargo, muchos de los casos resistentes a los medicamentos se han informado recientemente, debido a la mutación dentro del dominio quinasa del gen de fusión BCR-ABL1. Con el fin de proporcionar más información sobre esta incidencia, realizamos un estudio retrospectivo de 141 pacientes con leucemia mieloide crónica resistente a imatinib para analizar la mutación del dominio quinasa mediante secuenciación profunda. Otro grupo de 20 pacientes no tratados se añadió como control. Métodos: se extrajo el ARN de las células de la médula ósea y se siguió con la síntesis de ADNc. Se realizó una reacción en cadena de la polimerasa anidada para amplificar el dominio quinasa del gen de fusión BCR-ABL1. Los productos amplificados fueron monitoreados en tamaño, concentración y biblioteca de secuenciación de ADN preparada. El análisis de la secuencia se realizó con el secuenciador Illumina MiSeq y el software Sequence Pilot. Los resultados de la secuenciación se eligieron aleatoriamente para la secuenciación de Sanger. Resultados: Ninguno del grupo de control fue positivo con la mutación del dominio quinasa. Hubo 47 de 141 pacientes (33%) detectados con al menos una sustitución de nucleótidos. Los resultados de la secuenciación también fueron confirmados por la secuenciación de Sanger. De esas 47 muestras, se identificaron 72 sustituciones de nucleótidos de 28 tipos, 24 codones alterados. Entre ellas, Y253F/H, M351T, G250E, F359V/I y M244V fueron las mutaciones más frecuentes, mientras que T315I ocupó solo el 4,1 %. También hubo una serie de muestras que albergaban múltiples sustituciones y nuevas variaciones. Conclusión: la secuenciación profunda de próxima generación es un método sensible y eficaz para detectar la mutación del dominio quinasa y nuestros resultados podrían proporcionar más información sobre la mutación de resistencia a los medicamentos en la leucemia mieloide crónica.