Clonación y transgénesis
Acceso abierto

abstracto

Uso de un modelo in vitro simple y económico para estudiar la leucemia mieloide crónica en laboratorios de investigación

Raghda Elsawi, Eman Abd El Moemen Mohammed, Noha Mohsen Abogresha, Manal Said Fawzy y Somaya Hosny

Antecedentes: la leucemia mieloide crónica (LMC) es la neoplasia más común asociada con una aberración cromosómica recurrente (gen bcr-abl fusionado en el cromosoma Filadelfia). Los métodos utilizados actualmente para generar el gen bcr-abl son muy costosos y no factibles en laboratorios con instalaciones limitadas. Por lo tanto, este estudio tuvo como objetivo utilizar un método simple, seguro y económico para generar el gen bcr-abl para ser utilizado en investigaciones de LMC.

Métodos: se evaluó la expresión de Bcr-abl en dos grupos; CD34+HSC de sangre de cordón umbilical (UCBCD34+HSC) nucleofectadas con el plásmido P210pcDNA3 (n=5) y UCBCD34+HSC nucleofectadas con el plásmido que codifica GFP (pMAX-GFP) (n=5). Luego, se realizó la selección del antibiótico neomicina (G418). La expresión estable del gen bcr-abl en clones de P210pcDNA3 UCBCD34+HSCs resistentes a G418 se evaluó mediante análisis PCR cuantitativo de la expresión del gen de la proteína accesoria del receptor de interleucina uno (IL1RAP). Se ha descubierto recientemente que el gen IL1RAP se expresa en la superficie de las células positivas para bcr-abl.

Resultados: los clones P210pcDNA3 resistentes a G418 mostraron un aumento de hasta once veces en la expresión del gen IL1RAP en comparación con los clones pMAX-GFP. Nuestros resultados demostraron cómo es probable que la nucleofección de plásmidos convencionales induzca la expresión génica en las HSC.

Conclusión: Este método simple de generar el gen bcr-abl que expresa HSC CD34+ abrirá nuevos ingresos para la investigación de la leucemia mieloide crónica, especialmente en laboratorios que no están equipados para la investigación avanzada y costosa del cáncer. Además, la sobreexpresión de IL1RAP en la superficie de bcr-abl +CD34+HSC podría usarse como indicador de una expresión exitosa y estable de bcr-abl.