Enfermedades micobacterianas
Acceso abierto

abstracto

Uso de ultrasonicación como método de pretratamiento rápido para MS MALDI-TOF de muestras de micobacterias

Katsunao Niitsuma, Shizuko Koshiba, Miwako Saitou, Tomoko Suzuki, Kinuyo Chikamatsu, Akiko Takagi y Satoshi Mitarai

Antecedentes: En Japón, la espectrometría de masas de tiempo de vuelo con ionización por desorción láser asistida por matriz (MALDI-TOF MS) se utiliza como un método simple y preciso para la identificación de micobacterias, pero las técnicas de pretratamiento existentes requieren mucho tiempo y son laboriosas.
Objetivo: Caracterizamos una nueva técnica de pretratamiento que extrae proteínas mediante disrupción ultrasónica.
Métodos: Comparamos esta nueva técnica con el método de pretratamiento actual y examinamos la utilidad de la ultrasonicación, incluido su uso en la inactivación de micobacterias. Se analizó un total de 174 aislamientos de micobacterias, incluidas 50 cepas del complejo Mycobacterium tuberculosis, 57 cepas de Mycobacterium avium, 55 cepas de Mycobacterium intracelulare y 12 < em>Mycobacterium kansasii cepas. El método de pretratamiento ultrasónico se realizó con o sin pretratamiento térmico a 95°C durante 30 minutos, en paralelo con el método convencional actual. Para todas las cepas probadas, la identificación de micobacterias coincidió al comparar los métodos nuevos y convencionales.
Resultados: Las muestras preparadas por ultrasonicación sin pretratamiento térmico exhibieron múltiples diferencias significativas en comparación con las muestras preparadas por ultrasonicación con pretratamiento térmico o por métodos convencionales. Sin embargo, la mayoría de las puntuaciones fueron superiores a 2,0 y la puntuación más baja superó los 1,7. Además, las nuevas técnicas podrían realizarse en tan solo 10 minutos para el diagnóstico. Además, confirmamos que 1 minuto de pretratamiento ultrasónico produjo la inactivación completa de M. tuberculosis cepas complejas.
Conclusión: Se espera que la técnica más rápida de extracción/inactivación de proteínas por ultrasonicación sin pretratamiento térmico sea muy útil en entornos de laboratorio clínico.