Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Las condiciones optimizadas de la electroforesis bidimensional en gel de poliacrilamida para la proteómica del suero

Raju VS. Rajala

El análisis del proteoma del suero ofrece un enfoque potencialmente prometedor en el diagnóstico de enfermedades y el seguimiento terapéutico. Sin embargo, el amplio rango dinámico de las proteínas, la alta abundancia de proteínas, el exceso de sal y lípidos en el suero hacen que el análisis sea muy desafiante. Por lo tanto, es imperativo mejorar la disolución de proteínas en la electroforesis en gel bidimensional (2-DE) y mejorar la capacidad de analizar el proteoma del suero en una amplia variedad de condiciones fisiológicas. Este estudio examinó los efectos de varias combinaciones de agotamiento de proteínas altamente abundantes, medios precipitados, tratamiento con SDS caliente y tiras de IPG con diferentes pH en el mapa 2-DE para suero de ratón. Finalmente, la eliminación de proteínas altamente abundantes en suero mediante la columna de eliminación de albúmina ProteoExtractTM, la precipitación con etanol, el calentamiento con SDS al 2,5 % y DTT al 2,3 % para desnaturalizar la muestra a 95 °C durante 3 min, e IEF en tiras de IPG de pH 4-7 (17 cm). ) con 100 μg de proteínas séricas empobrecidas se recomiendan generalmente para el análisis del proteoma sérico en 2-DE mediante tinción con plata, que puede mejorar eficazmente la resolución y la intensidad de las proteínas poco abundantes. Las condiciones optimizadas ayudan a producir un mejor gel de 2-DE de referencia de muestras de suero para la identificación posterior de posibles marcadores de enfermedades novedosas.