Revista de ciencia y terapia celular
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abstracto

TATκ Proteína de fusión de OCT-3/4 y KLF-4: líneas celulares estables de población mixta capaces de administrar proteínas de fusión a las células diana

Fazlina Nordin, Gee Jun Tye, Joop Gaken y Farzin Farzaneh

Un cuerpo de evidencia en rápido crecimiento ha demostrado que la expresión forzada de un pequeño panel de genes, incluyendo Oct-3/4, KLF4, Sox2 y c-Myc, pueden inducir la reprogramación de células previamente diferenciadas, para generar Células Madre Pluripotentes Inducidas (iPSCs). Sin embargo, la generación de iPSCs por modificaciones genéticas aumenta el riesgo de transformación maligna. Por lo tanto, es altamente deseable una reprogramación in vitro eficiente de células diferenciadas, sin modificación genética irreversible. El transactivador mejorado de la transcripción kappa (TATκ), un TAT-HIV sintético, confiere la capacidad de administrar varias proteínas en las células diana, lo que lo convierte en un posible mecanismo alternativo de administración de factores de transcripción o agentes terapéuticos. Utilizando la proteína de fluorescencia verde (GFP) y la apoptina como proteínas modelo, hemos descrito recientemente una estrategia para generar líneas celulares que secretan proteínas que llevan un dominio de transducción de proteínas (PTD) HIV-TAT modificado para la posterior absorción mediada por la transducción de proteínas por las células diana. Usando esta estrategia hemos generado células 293T que secretan los factores pluripotentes Oct-3/4 o KLF4 en fusión con TATκ. Oct-3/4 y KLF4 se detectaron en el medio de cultivo de la célula 293T transducida y la captación de Oct-3/4 por las líneas celulares hematopoyéticas JURKAT y FDCP-1 se confirmó mediante análisis de transferencia Western. KLF4 estaba presente en el medio de cultivo de la célula productora 293T, pero aún no podemos demostrar la captación por parte de las células diana. Según los resultados obtenidos, esperamos que estas líneas celulares de población de mezcla estable puedan desempeñar un papel importante en la generación de iPSC con fines terapéuticos.