Revista de glucómica y lipidómica
Acceso abierto

abstracto

Análisis estructural de los N-glicanos unidos a la Na⁺/K⁺-ATPasa

Mayumi Kanagawa, Kana Matsumoto, Noriyuki Iwasaki, Yutaro Hayashi y Yoshiki Yamaguchi

Na+/K+-ATPasa de riñón de cerdo una glicoproteína de membrana compuesta por α, β y γ subunidades, generando gradientes iónicos a través de las membranas plasmáticas. El bombeo de iones se logra principalmente por el α subunidad, mientras que la glicosilada β la subunidad se une fuertemente a la α subunidad para ensamblar la bomba y juega un papel esencial en la estabilización y maduración de la Na+/K+-ATPasa. La evidencia acumulada sugiere que los N-glicanos del β subunidad contribuyen a la interacción célula-célula y la estanqueidad de los contactos celulares es modulada por la ramificación de N-glicanos. Sin embargo, la función de los N-glicanos no se comprende por completo debido a la falta de información detallada sobre la estructura del oligosacárido. Aquí, realizamos perfiles de glicosilación de los N-glicanos unidos a la Na+/K+-ATPasa de riñón de cerdo para comprender mejor el mecanismo de adhesión celular mediada por Na+/K+-ATPasa.

Purifi camos Na+/K+-ATPasa de la médula externa de riñón de cerdo hasta la homogeneidad y la solubilizamos con el detergente C12E8. La enzima así obtenida se identificó como subtipo α1β1 por análisis LC-MS/MS de digestiones trípticas. Durante el curso del análisis de MS, encontramos que Lys456 del α subunidad se modificó parcialmente con 4-hidroxinonenal, un producto de peroxidación lipídica aldehídrica. Se confirmó que tres sitios de N-glicosilación en la subunidad β1 estaban completamente ocupados mediante el análisis del curso del tiempo de la deglicosilación enzimática monitoreada por SDS-PAGE. El perfil de HPLC de oligosacáridos piridilaminados derivados de Na+/K+-ATPasa mostró que predominan los oligosacáridos de tipo alto en manosa mientras que la mayoría de los oligosacáridos de tipo complejo menos abundantes están rematados con residuos de galactosa. No se pudieron detectar glicanos en los cuatro sitios de N-glicosilación de consenso en la subunidad α1. Discutimos brevemente la posibilidad de que la oligomerización de Na+/K+- ATPasa vía β-β interacciones ensambla los N-glicanos y promueve la adhesión célula-célula.