Revista de Oftalmología Clínica y Experimental
Acceso abierto

abstracto

Estandarización del aislamiento de células endoteliales corneales humanas y el uso de membrana amniótica humana denudada como andamio para células endoteliales corneales humanas

Kalpana Suresh, Alan Mathew Punnoose, Sarah Kuruvilla y Tanvi Khanna

Objetivos: estandarizar el aislamiento de células endoteliales corneales humanas (HCEC) y utilizar la membrana amniótica humana denudada (HAM) como andamio para HCEC aisladas.
Métodos: La membrana amniótica humana se denudó utilizando 1,2 unidades/ml de Dispase II a 37 °C durante 60 minutos, seguido de un raspado mecánico. El endotelio corneal y las láminas de membrana de Descemet se pelaron de ojos cadavéricos de donantes humanos no aptos para uso quirúrgico y se digirieron enzimáticamente con 2 mg/ml de solución de colagenasa II a 37 °C y CO2 al 5 % durante 2 horas. Las células aisladas se resuspendieron en medio de cultivo con suplementos y se sembraron en placas de cultivo sin recubrir durante cuatro horas para eliminar los fibroblastos que se adhieren más rápidamente que las células endoteliales. Después del preplacado, las células no adherentes se sembraron en placas recubiertas de gelatina o en una membrana amniótica desnuda en medio OptiMEM suplementado con factores de crecimiento. Las células se analizaron por microscopía para determinar la adherencia y la morfología poligonal.
Resultados: La microscopía de la membrana amniótica denudada no mostró restos de células epiteliales. La digestión enzimática de la córnea dejó láminas acelulares de Descemet con las células endoteliales flotando individualmente o en grupos con un preenchapado que ayudó a un aislamiento de células endoteliales más libre de fibroblastos. Pocas células aisladas lograron incorporarse a la membrana amniótica y retener esa adhesión durante los reemplazos de medios posteriores.
Conclusión: El tratamiento prolongado de HAM con la enzima suave Dispase-II da como resultado la denudación de la membrana, que sirve como un andamio exitoso para las células endoteliales de la córnea recolectadas. Este enfoque puede explorarse más a fondo como una alternativa rentable para la proliferación de células endoteliales y como un modelo in vitro para estudios de ingeniería de tejidos corneales.