Revista de Inmunología Clínica y Celular
Acceso abierto

abstracto

Expresión estable y caracterización de un receptor de manosa optimizado

David J Vigerust, Sherell Vick y Virginia L Shepherd

El receptor de manosa (MR) es un receptor de superficie de macrófagos que reconoce patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP) de una amplia gama de patógenos bacterianos, fúngicos y virales. Los estudios funcionales del MR se ven obstaculizados por la escasez de líneas celulares humanas que expresen el receptor. Los sistemas modelo actuales disponibles para el estudio de la biología de la RM a menudo demuestran bajos niveles de expresión y no conservan muchas de las propiedades clásicas de la RM. Aunque varios laboratorios han informado de la expresión transitoria y estable de MR a partir de plásmidos, los datos preliminares de nuestro laboratorio sugieren que estos plásmidos producen una proteína que carece de dominios críticos y, a menudo, no es estable con el tiempo. En este informe actual, describimos la generación y caracterización de un nuevo sistema optimizado por codones humanos para la expresión de RM transitoria y estable. Se modificaron secuencias y codones raros que contribuyen a la inestabilidad del ARNm para producir un ARNm mejorado cualitativa y cuantitativamente. La proyección de imagen confocal del receptor optimizado transitorio y establemente expresado demuestra una distribución consistente con informes anteriores. Para demostrar las características funcionales del receptor optimizado, mostramos además que la introducción de plásmido MR optimizado por codón puede conferir fagocitosis de S asociada a MR. aureus a células HeLa no fagocíticas. Mostramos que tres moléculas participan en el compromiso y la internalización de S. aureo. Se descubrió que MR se colocaliza con el receptor tipo Toll 2 (TLR2) y Rab5 después de la exposición a S teñido con pHrodo. aureus, lo que sugiere la cooperación entre las tres moléculas para acoplarse e internalizar la partícula bacteriana. Este estudio describe un receptor de MR optimizado con capacidad de transfección con características funcionales similares al receptor de tipo salvaje y demuestra además un nuevo sistema para el estudio continuo de la biología y la función de MR