Técnicas Avanzadas en Biología y Medicina
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abstracto

Detección de mutaciones/SNP a través del análisis espectrofotométrico de la curva de fusión: un estudio preliminar sobre el método no electroforético y sin colorante para la detección de mutaciones

Arif Ahmad*, Mohammad Shahid, Mohammad Raish y Syed Akhtar Husain

Los métodos actualmente disponibles para la detección de mutaciones requieren una sonda/tinte marcado con fluorescencia o electroforesis o ambos que hacen que estos métodos sean tediosos, costosos y lentos. Aquí describimos un método de detección de mutación/SNP sin necesidad de sonda/tinte y electroforesis. La técnica requiere solo producto PCR y espectrofotómetro con peltier. Examinamos la mutación monitoreando el perfil de fusión del ADN y la temperatura de transición de homodúplex y heterodúplex mediante el registro de la absorbancia de UV mediante fusión dúplex. La absorbancia para cada dúplex se midió a 260 nm de 60 °C a 85 °C con un incremento de temperatura de 1 °C utilizando un espectrofotómetro que tiene Peltier con una velocidad de calentamiento de 1 °C/min. En las muestras heterodúplex hay un rápido aumento en la absorbancia de UV a temperaturas de transición de 70°C. Mientras que en la muestra homodúplex se alcanza a partir de los 75°C. La mutación en la muestra se detectó al observar la disminución de la temperatura de transición de las muestras heterodúplex en comparación con las homodúplex.