Revista de Medicina Perioperatoria
Acceso abierto

abstracto

La detección del gen de la globina β (HBB) para mutaciones raras en pacientes con talasemia β incluyó hemoglobina S D-Punjab mediante secuenciación de Sanger

Zeeshan Ansar

Objetivo: β-talasemia es un trastorno autosómico recesivo que resulta en la formación de hemoglobina anormal debido a una variedad de mutaciones diferentes que se encuentran en el gen HBB. Estas mutaciones hacen que los pacientes sean incapaces de producir la forma correcta de hemoglobina. El objetivo de este estudio fue identificar mutaciones del gen HBB en pacientes β-talasémicos, no incluidos en el panel de mutación común de ARMS PCR, mediante la secuenciación de codificación HBB, intrónico y promotor.

Método: Un total de 10 muestras analizadas previamente para mutaciones del gen HBB por ARMS PCR common-panel (es decir, IVS 1-1, IVS 1-5, Codon 8/9, Codon 41/42 y 619bp deleción) se analizaron mediante secuenciación de Sanger. Se incluyeron dos sujetos sanos como controles negativos. Se aisló ADN genómico y se amplificó el gen HBB. Los productos amplificados purificados en columna se utilizaron para la secuenciación del ciclo bidireccional (Big Dye Terminator, ABI, EE. UU.).

Resultados: En el presente estudio, se tomaron un total de 10 muestras analizado. Cuatro eran hombres y seis mujeres. La media de los pacientes fue de tres años. Todos los pacientes fueron diagnosticados como β-talasemia mayor en base a sus antecedentes familiares, hallazgos clínicos y de laboratorio. En promedio, los pacientes recibían transfusiones cada dos semanas. Se detectaron siete mutaciones raras en el gen HBB, incluidas mutaciones puntuales. Las mutaciones abarcaron la región promotora HBB:c.138C>A (-88 C>A), exon1 HBB:c.17_18delCT (Codon5 –CT), HBB:c.47G>A (Codon15 G>A), HBB :c.92G>C (Codon30 G>C), HBB:c.50A>C (CAP+1 A>C), exon2 HBB:c.118C>T (Codon39) e intron2 HBB:c.315+1G> A (IVS II-I G>A) y un cambio heterocigoto en el codón 6 (GAG→GTG) y también una mutación heterocigota en el codón 121 (GAA→CAA). Todos los sujetos de control mostraron una secuencia del gen HBB normal. Además, se detectó un polimorfismo T>C en el codón 3 en la posición HBB: c.59 en la mayoría de los pacientes y controles.

Conclusión: Aunque ARMS PCR es un método rápido y conveniente para la detección de mutaciones comunes en el gen HBB, un pequeño subconjunto de pacientes puede pasarse por alto debido a mutaciones raras, que requerirían otros medios para el diagnóstico. La secuenciación de Sanger es una técnica precisa y sólida para tratar a estos pacientes.