Anatomía y fisiología: investigación actual
Acceso abierto
ISSN: 2161-0940
ISSN: 2161-0940
Sakara Tunsophon e Ilka Nemere
La proteína quinasa C (PKC) está involucrada en la rápida 1,25(OH) 2 Extrusión de calcio mediada por D 3 en células epiteliales intestinales de pollo. Un informe anterior demostró que la redistribución de PKC a y PKC b correspondía a la curva de respuesta a la dosis para la extrusión de calcio. Investigamos el papel de PKC a y PKC b en la extrusión de calcio estimulada por hormonas mediante el uso de siRNA en cultivos primarios de células intestinales. Los resultados indicaron que no hubo cambios en la extrusión de calcio en células transfectadas con siRNA a PKC a , mientras que el siRNA a PKC b disminuyó significativamente la extrusión de calcio en células tratadas con 1,25(OH) 2 D 3 en comparación con la hormona correspondiente. células tratadas en células transfectadas y no transfectadas (P < 0,01). También se encontraron resultados similares usando inhibidores químicos de PKC a (safingol) y PKC b ([3-(1-(3-imidazol-1-ilpropil)-1H-indol-3-il)-4-anilino-1H-pirrol -2,5-diona]) en suspensión de células intestinales. Los resultados demostraron que la PKCb inhibía la extrusión de calcio (lo que resultaba en un aumento de la absorción de calcio) de las células intestinales tratadas con 1,25(OH) 2 D 3 en comparación con los controles del vehículo (P < 0,001), el bloqueador de la PKC a no lo hacía. muestran alguna diferencia en la extrusión de calcio entre los grupos de tratamiento. Usando microscopía confocal, redujimos la exposición a la hormona a 30 segundos para ver la redistribución de PKC a y PKC b. Se descubrió que la redistribución rápida de PKC a aumentaba significativamente la fluorescencia en la región de la membrana apical después de una exposición de las células durante 30 segundos a 1,25 (OH) 2 D 3 a 300 o 650 pM (P < 0,01 y 0,001, respectivamente). En comparación, se encontró que la inmunofluorescencia de PKCb aumentaba significativamente en la región lateral basal de las células, en relación con los controles después de la exposición de las células a 300- (P < 0,01) o 650 pM (P < 0,05) de secoesteroide. Los resultados sugieren que PKC a es el isotipo de PKC implicado en la salida de calcio mediada por 1,25(OH) 2 D 3 en las células epiteliales intestinales.