Revista de métodos de diagnóstico médico
Acceso abierto

abstracto

Revalidación de la Prueba de Dispersión de Cromatina Espermática y el Ensayo Cometa Utilizando Estudios Intercomparativos Entre Esperma Humano Purificado sin y con Fragmentación de ADN en Etapa Terminal

Satoru Kaneko*, Kiyoshi Takamatsu

Objetivos: Realizar estudios intercomparativos para revalidar los principios y rendimiento cuantitativo de la Prueba de dispersión de cromatina espermática (SCD) y ensayo Comet (CA).

Métodos: Se purificaron espermatozoides humanos sin y con fragmentos granulares en etapa final de fragmentación a partir de semen normozoospérmico y se utilizan como controles negativos y positivos naturales (NC y PC, respectivamente). Tanto SCD como CA extrajeron nucleoproteínas con 2,0 mol/l de NaCl, 1,0 mmol/l de DTT. SCD determinó que El daño del ADN es inversamente proporcional al área del halo violeta. El CA estimó el nivel de daño en el ADN electroforéticamente a partir del número de fragmentos granulares; la llamada cola de cometa, sus características electroforéticas se compararon con la electroforesis en gel de campo pulsado de una sola célula (SCPFGE).

Resultados: Se determinó que el halo violeta en SCD consiste en nucleoproteínas teñibles con cristal violeta (CV) que adherido a las fibras de ADN radiadas. SCD no pudo distinguir entre NC y PC. Las nucleoproteínas residuales bloqueó la migración de ADN en la CA natural; en contraste, SCPFGE con digestión tríptica en gel descargó el fragmentos fibrosos y granulares más allá de las fibras de ADN alargadas. El CA alcalino se corrió ADN en 0.3 mol/L NaOH. Aunque el ADN se desmenuzó en fragmentos granulares, las nucleoproteínas residuales conservaron su unión. capacidad al ADN y aún fijó los fragmentos recién generados.

Conclusión: los análisis de fragmentación de ADN requieren medir una etapa temprana de fragmentación en células móviles separadas espermatozoides, la falta de proteolisis disminuye los rendimientos cuantitativos de CA neutro y alcalino. En general, el los resultados sugirieron que SCD y CA no eran lo suficientemente sensibles como herramientas para recolectar datos para estadísticas clínicas.