Técnicas Avanzadas en Biología y Medicina
Acceso abierto

abstracto

Restauración de la expresión génica mitocondrial utilizando un gen humano clonado en mutantes de células pulmonares de hámster chino

Zaki A Sherif y Carolyn W Broome

Antecedentes: Gal-32 es un mutante nuclear de células pulmonares de hámster chino que no puede crecer en galactosa debido a a un defecto en la síntesis de proteínas mitocondriales. Dado que se desconocía el producto del gen Gal-32, era imperativo utilizar la complementación fenotípica para clonar un gen humano que corrigiera la mutación Gal-32.

Resultados: se cotransformaron células Gal-32 recesivas con ADN del plásmido pSV2-neo y ADN recombinante de una biblioteca genómica humana que contenía el gen Gal+ humano dominante y un gen de resistencia al cloranfenicol (camr). presentes en el vector pSV13. Los transformantes primarios se seleccionaron por crecimiento en galactosa y el análogo de neomicina G418. Para rescatar el gen Gal+ humano, se construyó una biblioteca genómica con ADN transformante primario y el vector cósmido pCV108. El gen camr se usó para identificar clones con las secuencias humanas cercanas. El ADN de dos clones camr con hibridación Alu fue capaz de transformar las células recesivas Gal-32 al fenotipo Gal+ y restaurar la síntesis de proteínas mitocondriales.

Conclusión: Estos datos demuestran el aislamiento de dos clones recombinantes transformantes de pCV108 que contienen un gen humano que complementa la mutación Gal-32 del hámster chino y restaura el metabolismo de la galactosa.