Revista de métodos de diagnóstico médico
Acceso abierto
ISSN: 2168-9784
ISSN: 2168-9784
Satoru Kaneko, Kiyoshi Takamatsu
El ensayo de la estructura de la cromatina espermática (SCSA) basado en la fluorescencia policromática del naranja de acridina (AO) se emplea ampliamente para observar daños en el ADN en núcleos de esperma humano. Para reevaluar el principio de la SCSA, se prepararon espermatozoides móviles humanos con una tasa de fragmentación de ADN negativa del 87 % como control negativo (NC) y el Control Positivo (PC) se preparó mediante desnaturalización por calor de la NC. La tinción AO para el los controles se compararon sobre la base de observaciones microscópicas, electroforéticas y de citometría de flujo. Humano Los espermatozoides móviles se separaron por medio de centrifugación en gradiente de densidad de Percoll y posterior natación ascendente. Entonces, La fragmentación del ADN se observó con la ayuda de electroforesis en gel de campo pulsado de una sola célula.
Descubrimos que la molécula de AO emitía fluorescencia roja y verde según la longitud de onda de excitación. Ambos los controles cambiaron de color de verde a rojo a medida que aumentaba la concentración de AO y carecían de fluorescencia roja después de la digestión en gel con tripsina. El cambio de color de la NC de rojo a verde y la fragmentación del ADN procedió simultáneamente durante el fotoblanqueo. Los citogramas de NC y PC fueron similares entre sí. Estos hechos conflicto con el principio SCSA. Se emitieron fluorescencia verde y roja debido a la intercalación de AO en El ADN y la adsorción de AO a proteínas, respectivamente, y su fusión condujeron a la variación de color. Descoloramiento de rojo a verde durante el fotoblanqueo posiblemente se observó debido a la fluorescencia verde de los intercalados AO fue más tolerante a las especies reactivas de oxígeno que la fluorescencia roja de la adsorción de AO a algunas proteínas. En general, SCSA no puede detectar daños en el ADN en el núcleo del esperma humano.