Revista internacional de minería de datos biomédicos
Acceso abierto
ISSN: 2090-4924
ISSN: 2090-4924
VE Munyai, T Mulaudzi-Masuku y E Iwuoha
Abstracto
Introducción: el cáncer de mama es la causa principal de la mayoría de las incidencias mortales en mujeres en todo el mundo. Es inducido principalmente por la hormona estrógeno que estimula el ADN para que las células proliferen en células cancerosas. El tamoxifeno se administra como profármaco tanto para el tratamiento como para la prevención del cáncer de mama en mujeres y hombres con estrógeno positivo. Los metabolitos del tamoxifeno funcionan uniéndose y compitiendo con el estrógeno para unirse a los receptores de estrógeno, bloqueando así el desarrollo de células cancerosas. El citocromo p450-2D6 (CYP2D6) es una de las principales enzimas del metabolismo del tamoxifeno. Existe una diferencia interindividual en la respuesta al tratamiento con tamoxifeno debido al polimorfismo en esta enzima. Por lo tanto, existe la necesidad de diagnosticar si los pacientes que toman tamoxifeno pueden metabolizar el fármaco. El ensayo utilizado actualmente para el metabolismo del tamoxifeno del paciente tiene limitaciones que incluyen que no son específicas, consumen mucho tiempo y son rentables.
Objetivo: este estudio tuvo como objetivo desarrollar un biosensor electroquímico basado en CYP2D6 que evaluará el metabolismo del tamoxifeno en pacientes con cáncer de mama.
Métodos: Se determinaron los parámetros fisicoquímicos de CYP2D6 para allanar el camino para la amplificación del gen CYP2D6, la clonación en Vector pTrcHis TOPO, sobreexpresión en E.coli seguida de purificación, para obtener un CYP2D6 recombinante activo. El metabolismo del tamoxifeno por CYP2D6 se analizó utilizando espectros de emisión y UV-Visible y se validó mediante técnicas electroquímicas utilizando un biosensor basado en CYP2D6.
Resultados y discusión: CYP2D6 es una proteína transmembrana insoluble de 50,05397 kDa que es de naturaleza ligeramente ácida (pI = 6,21). El gen CYP2D6 fue amplificado con éxito caracterizado por una banda de 1,375 pb y posteriormente clonado en el vector pTrcHis TOPO. La proteína se sobreexpresó en células TOP10 de E. coli, se extrajo y purificó en condiciones desnaturalizadas ya que se expresaba en los cuerpos de inclusión. La proteína se replegó con éxito a su forma activa según lo determinado por el ensayo P450 GLO CYP2D6. CYP2D6 se caracteriza por una banda de Soret a 215 nm (UV-Vis) y 425 nm (espectros de emisión). Los ensayos electroquímicos indicaron que la enzima es activa y tiene la capacidad de metabolizar el tamoxifeno en sus formas activas a un potencial de 0,6 V. Por lo tanto, estos resultados son adecuados para aplicarlos en el desarrollo de un sensor basado en CYP2D6 para el metabolismo del tamoxifeno durante la terapia del cáncer de mama.