Ingeniería enzimática
Acceso abierto

abstracto

Radicalización de gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa por HOCl en células vivas

Sandra E Gomez-Mejiba, Zili Zhai, Marcos D Muñoz, Cecilia Della Vedova, Kalina Ranguelova, Michael T Ashby y Dario C Ramirez

Se han informado varias modificaciones oxidativas postraduccionales de la enzima "sensor redox celular" gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH). Estas modificaciones afectan la estructura, la función y el destino celular de GAPDH; sin embargo, no se han informado mecanismos de radicales libres en estos procesos. En este documento, utilizamos las técnicas de captura de giro basadas en nitrona 5,5-dimetil-1-pirrolina N-óxido (DMPO) para examinar un nuevo mecanismo de radicales libres que causa la inactivación y agregación de GAPDH en células RAW264.7 cebadas con lipopolisacárido (LPS). En estas células preparadas, la GAPDH es oxidada por el ácido hipocloroso (HOCl) derivado de la mieloperoxidasa (MPO), lo que provoca la pérdida de la actividad enzimática y la agregación, la acumulación de lactato y la muerte celular. Debido a la estrecha proximidad espacial y física entre MPO y GAPDH, y el potencial oxidante de HOCl, puede ser la especie principal que desencadena la radicalización de GAPDH que finalmente da como resultado la agregación e inactivación de enzimas en macrófagos cebados con LPS. Los residuos de lisina son los principales sitios de radicalización que se forman tras la reacción de HOCl con la enzima. Nuestros datos destacan la importante relación entre la radicalización de GAPDH y el destino de las células estresadas, lo que podría ayudar a desentrañar la respuesta celular al estrés en los sitios de inflamación.