Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Purificación y caracterización de la glutatión-S-transferasa de hígado de rata: efecto del tetracloruro de carbono y la leche de camello

Mohamed Lebda, Nabil Taha, Saad Noeman, Mahdy Korshom, Abd El-Wahab Mandour y Ahlam El-Leboudy

Las glutatión-S-transferasas (GST) constituyen una familia multifuncional de enzimas de biotransformación diméricas y principalmente citosólicas que desempeñan un papel importante en la protección de los tejidos del estrés oxidativo. Catalizaron la conjugación del glutatión intracelular con una gran variedad de productos químicos que poseen un centro electrofílico y los conjugados de GSH finales tenían una mayor hidrofilia que facilita su posterior metabolismo y eliminación. Nuestro estudio se llevó a cabo para purificar la enzima GST del hígado de rata mediante cromatografía de afinidad de un paso e investigar el efecto inhibitorio del tetracloruro de carbono y el efecto de mejora de la administración de leche de camella. La purificación de la enzima GST reveló que la concentración de proteína disminuyó en el filtrado de afinidad de GSH que en el extracto crudo, mientras que la actividad enzimática específica aumentó, lo que indica que el paso de purificación único cortó las otras proteínas y conservó la proteína de la enzima GST. CCL4 disminuye la Vmax y aumenta la Km para los sustratos GSH y CDNB que el control, lo que indica que CCL4 puede ser un inhibidor no competitivo de la enzima GST, mientras que la leche de camella aumenta la Vmax y disminuye la Km para los sustratos GSH y CDNB, lo que indica que la leche de camella aumenta la afinidad de la enzima por ambos sustratos. La actividad de GST aumentó al aumentar la concentración de sustrato hasta alcanzar la actividad máxima, después de lo cual la actividad de GST formó una meseta. En cuanto al efecto de la temperatura sobre la actividad de GST, la máxima actividad de GST se observó entre 25-35°C y se inactivó por encima de los 40°C. La actividad de GST aumentó cuando el pH aumentó progresivamente hasta alcanzar la actividad máxima a un valor de pH de 7,1 y disminuyó cuando aumentó el pH. Nuestra conclusión indica que CCL4 es un inhibidor no competitivo de la enzima GST, mientras que la leche de camella aumenta la actividad y la afinidad de la enzima hacia sus dos sustratos.