Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Purificación y caracterización bioquímica de un inhibidor de tiol proteinasa similar a la cistatina de Cicer arietinum (garbanzo)

Sheraz AB, Waseem FB, Aaliya S, Shahnawaz KM, Rizwan HK y Bilqees B*

Las cistatinas son inhibidores de tiol proteinasa presentes de forma ubicua en muchas plantas y tejidos animales. En el presente estudio, se aisló una cistatina como un inhibidor de la tiol proteinasa del garbanzo usando fraccionamiento con sulfato de amonio (40-60 %) y cromatografía de filtración en gel en una columna Sephacryl S-100 HR con un rendimiento del 21,09 % y una purificación de 78,89 veces. Dio una masa molecular de aproximadamente 25,3 kDa determinada por SDS-PAGE, Dynamic Light Scattering (DLS) y por su comportamiento de filtración en gel. Se encontró que el inhibidor tenía un contenido de carbohidratos muy bajo (0,34%) y una cantidad escasa (1,45%) de contenido de sulfhidrilo. El radio de Stokes, los coeficientes de fricción, difusión y sedimentación de CPC fueron 4.299 × 10^-8 g/s, 22,82 Å, 12,68 × 10^-7 cm² s^-1 y 2,64 S, respectivamente. El análisis cinético de CPC con tiol proteinasas (papaína, ficina, bromelina) reveló el modo de inhibición reversible y competitivo con CPC que muestra la mayor eficacia inhibidora contra papaína (Ki = 0,82 nM), seguido de ficina (Ki = 17,6 nM) y luego bromelina ( Ki = 41,3 nM). El CPC poseía aproximadamente un 25,34% de contenido α-helicoidal evaluado por espectroscopía de CD. Los espectros UV-Visible y de fluorescencia indicaron que tras la formación del complejo papaína-CPC se produce un cambio conformacional significativo en una o ambas proteínas del complejo.