Revista de Proteómica y Bioinformática
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abstracto

Análisis proteómico de cultivos de biorreactores de un anticuerpo que expresa CHOGS Línea celular que promueve una alta productividad

Haimanti Dorai, Suli Liu, Xiang Yao, Yonghui Wang, Uelke Tekindemir, Michael J Lewis, Shiaw-Lin Wu y William Hancock

Desarrollo de línea celular de fabricación de anticuerpos en Janssen Research & El desarrollo implica la transfección de genes de anticuerpos terapéuticos en una línea de células huésped CHO-GS y el aislamiento de transfectomas primarios que, tras la clonación, producen líneas celulares de alta expresión que secretan los productos de anticuerpos deseados. Posteriormente, estas líneas celulares se cultivan en biorreactores de tanque agitado para la generación a gran escala de los productos. En un intento por optimizar este proceso para una alta productividad, se emprendió un enfoque de dos frentes.

Primero, en un estudio de diseño de experimentos, se cultivó una línea celular CHO-GS que expresaba un anticuerpo terapéutico en minibiorreactores alimentados por lotes DasGip de 2 L en una variedad de condiciones de cultivo. En general, las condiciones de cultivo que promovieron un crecimiento robusto y una alta densidad de células viables dieron como resultado una alta productividad. Luego, las cosechas de cultivos celulares y los lisados celulares de dos plantas de ‘alta productividad’ y dos de ‘baja productividad’ los biorreactores se sometieron a análisis proteómico utilizando la base de datos del genoma de CHO, en dos días independientes. A continuación, se compararon los niveles de cada proteína expresada en estos dos conjuntos de biorreactores. De este modo, se identificaron un total de 180 proteínas que se modularon el doble o más, de las cuales solo 12 se modularon consistentemente a lo largo de varios días en cultivo. Las proteínas moduladas tienen funciones de procesos biológicos que están relacionadas con el reordenamiento del citoesqueleto, la síntesis de proteínas, el metabolismo celular y el crecimiento celular. Siempre que estas observaciones sean validadas por Western blot, una o más de estas proteínas, cuya expresión se correlaciona con la productividad, pueden utilizarse potencialmente como objetivos para manipular una línea de células huésped de transfección superior. Como mínimo, los niveles de expresión de estas proteínas pueden proporcionar información para futuros esfuerzos de optimización de procesos.