Biología Sintética y de Sistemas Actual
Acceso abierto

abstracto

Promoción de la Actividad Extracelular de Celobiohidrolasa I de Trichoderma reesei por ingeniería de glicosilación de proteínas en Saccharomyces cerevisiae

Lili Xu, Yu Shen, Jin Hou, Hongting Tang, Chengqiang Wang y Xiaoming Bao

La N-glucosilación en Saccharomyces cerevisiae es del tipo alto en manosa, que afecta la actividad de las glicoproteínas heterólogas secretadas. La celobiohidrolasa I (Tr-Cel7A) de Trichoderma reesei, por tanto, se hiperglucosila cuando se expresa en S. cerevisiae. En el presente trabajo, tres genes que codifican las manosiltransferasas endógenas, Och1p, Mnn9p y Mnn1p, involucradas en el procesamiento de glicoproteínas en el aparato de Golgi de S. cerevisiae, se interrumpieron de forma individual o combinatoria para investigar el efecto del grado de glicosilación en la actividad de la Tr secretada. -Cel7A. La glicosilación del Tr-Cel7A recombinante disminuyó y su actividad extracelular aumentó en todos los mutantes por deleción. La eliminación simultánea de och1 y mnn1 tiene la mayor mejora en la actividad extracelular de Tr-Cel7A. Después de expresar la α-1,2-manosidasa (Tr-Mds1p) de T. reesei en mnn1Δ/och1Δ cepa, la actividad Tr-Cel7A se incrementó aún más hasta 320 ± 8% más alto que el de la cepa de tipo salvaje. Tal mejora de la actividad se debió no sólo al mayor rendimiento de secreción sino también a la mayor actividad específica resultante de los cambios en la glicosilación. Por lo tanto, los resultados indicaron que la ingeniería de glicosilación de proteínas en S. cerevisiae fue un enfoque eficaz para mejorar la actividad extracelular de Tr-Cel7A.