Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Perfilado del proteoma de balsa lipídica de células de leucemia linfocítica crónica MEC1 humana

Munther Alomari, Swetlana Mactier, Kimberley L. Kaufman, O. Giles Best, Stephen P. Mulligan y Richard I. Christopherson

Las balsas lipídicas son microdominios especializados ubicados en la membrana plasmática externa de las células y desempeñan funciones importantes en varias funciones celulares, incluidas las vías de señalización celular, secretoras y endocíticas . El perfilado de la superficie celular, en particular el proteoma de la balsa lipídica, ha despertado interés en la oncología debido al uso potencial de las proteínas balsa como nuevos objetivos para el diagnóstico y la terapia. Se han utilizado tres métodos diferentes para identificar el proteoma de la balsa lipídica de la línea celular MEC1 de la leucemia linfocítica crónica (LLC) humana. En primer lugar, las proteínas de la balsa lipídica se enriquecieron e identificaron mediante ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y cromatografía líquida 2D acoplada a espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS). Para confirmar la localización de la proteína en la balsa de lípidos, los proteomas se compararon antes y después del agotamiento del colesterol por metil-β-ciclodextrina (MβCD) utilizando etiquetas isobáricas para el etiquetado de cuantificación relativa y absoluta (iTRAQ) acoplado a LC 2D -MS/MS. Las proteínas de la balsa lipídica también se identificaron mediante inmunoprecipitación de CD20 entrecruzado, una proteína de tetraspanina que se traslada a la balsa lipídica después del tratamiento con el anticuerpo terapéutico, rituximab. En total, se encontraron 643 proteínas en balsas lipídicas de células CLL (580 después de ultracentrifugación en gradiente de sacarosa, 181 agotadas por MβCD y 199 aisladas por inmunoprecipitación) y 64 proteínas fueron identificadas por los 3 métodos). Estos datos representan el primer perfil completo del proteoma de la balsa lipídica en células de CLL e incluye 30 proteínas sin asociación conocida previa con la balsa lipídica. Estas proteínas pueden representar nuevos objetivos diagnósticos y terapéuticos para la CLL.