ISSN: 2456-3102
Vadim Timerbaev, Sergey Dolgov y Tatyana Mitiouchkina
Independientemente de la expansión en la cantidad de tipos de plantas construidos hereditariamente y su evidente practicidad monetaria, tales cosechas son conscientemente reconocidas por la sociedad, principalmente debido a la proximidad de material hereditario externo de formas de vida lejanas (organismos microscópicos, infecciones, etc.). .) para la declaración de cualidades diana en plantas transgénicas y como marcadores particulares de protección frente a antitoxinas y herbicidas. En estas condiciones se da una desesperación única a los procedimientos mediante los cuales se pueden realizar nuevos tipos de rendimientos profundamente beneficiosos sin material hereditario externo, básicamente de origen bacteriano, y sin cualidades de oposición antiinfecciosa.
Dado que las técnicas para obtener sin marcadores seres vivos han cobrado extraordinaria importancia recién en la década más reciente, la gran mayoría de las investigaciones se dedican a la mejora de nuevas innovaciones y marcos vectoriales. En este trabajo, para eliminar el ADN problemático, utilizamos una recombinasa explícita en el sitio que pertenece a los vectores pMF (Plant Research International, Wageningen, Países Bajos) (Schaart et al., 2004). La posición preferida fundamental de este marco es su doble elección sucesiva. La etapa principal después del cambio intercedido por Agrobacterium es la determinación de regenerantes mediante el uso de antimicrobianos, por ejemplo, kanamicina, higromicina o fosfinotricina, y la posterior eliminación de grupos de ADN. flanqueado por los destinos de recombinación perfectos (RS) ocurre debido al inicio de la mezcla de la recombinasa R que se inactiva a la vista del área de restricción del ligando (LBD) de un receptor de glucocorticoides. Su actuación se completa después de empollar el tejido vegetal en una respuesta de dexametasona (Dex). La elección adicional de un medio con 5-fluorocitosina (5-FC) impide la mejora de los tejidos vegetales que contienen la calidad codA (la citosina desaminasa cambia sobre el 5-FC no venenoso a 5-fluorouracilo citotóxico).
La proximidad de las cualidades marcadoras, en particular la oposición antimicrobiana, en las plantas modificadas hereditariamente es motivo de preocupación para el público debido a los temores relacionados con los peligros para la tierra y el bienestar humano. La formación de plantas transgénicas que no contienen el material hereditario externo, particularmente la raíz bacteriana y viral, alivia en gran medida la cepa. Aquí utilizamos el marco pMF que contiene la recombinasa R de Z. rouxii y una calidad seleccionable bifuncional CodA-nptII para producir plantas transgénicas de tomate y manzana sin marcador que transmiten la calidad muy dulce de thaumatinII de la planta tropical Thaumatococcus daniellii nivelada fuera del producto natural de calidad E8 explícito anunciante y eliminador de rbsS3A. Utilizamos dos alistamientos de recombinasa diversos.
Elección temprana de callos esenciales y tratamiento pospuesto con decsametasona de hojas o pecíolos de plantas transgénicas con elección adicional en medios 5-FC. Como electivo, cambiamos las plantas por vector transportado solo con cinta de articulación de taumatina sin marcadores específicos. Los transgenes para esta situación se eligieron mediante investigación por PCR de todos los regenerantes obtenidos. Hemos adquirido 170 líneas transgénicas de tomate que han sido diseccionadas en total por PCR. Después de la aceptación del movimiento de la recombinasa, solo un tomate transgénico completamente sin marcadorse consiguió la línea. Los resultados comparativos se obtuvieron por determinación temprana. El cambio directo por la cinta thaumatinII también se produjo en dos plantas libres de marcadores. Recomendamos que una extracción fragmentada y revisiones cromosómicas debido a la proximidad de varias inclusiones de ADN-T atípicas o incompletas ocurran en diferentes instancias de plantas de tomate de cambio simple .
También obtuvimos tres líneas transgénicas libres de manzana que fueron completamente diseccionadas por PCR para determinar la proximidad de las sucesiones de ADN-T. En ese momento utilizamos la metodología diferida para la elección de plantas sin marcador con una línea marcada que contenía todas las piezas de cinta de articulación. Después de la aceptación del movimiento de la recombinasa hemos obtenido más de 30 sublíneas, la mayor parte de ellas perdieron su protección frente a la kanamicina. El examen de frotis de PCR y Southern reveló que todos los problemas y arreglos desafortunados entre los destinos de RS se eliminaron mediante un proceso de recombinación, mientras que el nivel de entusiasmo con componentes administrativos está disponible en plantas totalmente adquiridas. De todos modos, mediante el examen de PCR de cantidad parcial podemos distinguir la articulación de la calidad de la taumatina en la mayoría, pero no en todas las sublíneas. El sistema de determinación temprana como cambio inmediato fue ineficaz para la creación de plantas de manzana libres de marcadores. El marco pMF es razonable para la creación sin marcador de manzana u otras cosechas obstinadas, como cisgénicolas plantas de tomate pueden ser adquiridas por cambio directo por la calidad de la intriga. El examen fue subvencionado en cierta medida por un premio de exploración Nº 14-50-00079 de la Russian Science Foundation.