Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Fosfoproteómica avanzada con técnicas de micromatrices basadas en etiquetas

Eiji Kinoshita, Emiko Kinoshita-Kikuta y Tohru Koike

La fosforilación reversible de proteínas es una modificación postraduccional dominante que regula muchos procesos celulares importantes, incluida la transducción de señales, la expresión génica y la progresión del ciclo celular. Los cambios en el estado de fosforilación de ciertas proteínas se han implicado en una amplia gama de enfermedades humanas. Las técnicas analíticas eficaces para la determinación cuantitativa de los niveles de fosforilación de proteínas son, por tanto, herramientas esenciales para los estudios sobre el proteoma, especialmente en relación con el diagnóstico de enfermedades y el descubrimiento de fármacos. La identificación a gran escala de fosfoproteínas ahora es posible como resultado de los avances dramáticos en los métodos de proteómica de escopeta basados en espectrometría de masas. Sin embargo, estas técnicas requieren instrumentación costosa e involucran procedimientos complicados para la preparación de muestras a través del enriquecimiento de fosfopéptidos por digestión enzimática. Con respecto al análisis del fosfoproteoma, las técnicas de micromatrices que involucran matrices de péptidos o proteínas han demostrado un potencial considerable como enfoques rentables, de alto rendimiento y convenientes para definir actividades relacionadas con la transducción de señales por medio de reacciones de fosforilación. Recientemente desarrollamos una sonda de afinidad por fosfato que es adecuada para monitorear cambios en los niveles de fosforilación de proteínas. Esta sonda de afinidad se conoce como Phos-tag colgante de biotina {Phos-tag Biotin; Phos-tag = complejo 1,3-bis[bis(piridin-2-ilmetil)amino]propan-2-olato dicinc(II)}. Hemos demostrado la utilidad de Phos-tag Biotin como una nueva sonda de afinidad por fosfato en una variedad de técnicas, incluidos los métodos basados en micromatrices, para determinar el estado de fosforilación de un gran número de péptidos y proteínas. Aquí, revisamos algunas de las aplicaciones más avanzadas de Phos-tag Biotin. Discutimos el impacto de las técnicas de micromatrices basadas en Phos-tag en relación con la detección de multiplexaciones de fosforilación de proteínas, y comparamos estas técnicas con los procedimientos de sondeo convencionales en micromatrices.