Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Unión de P53 y etiqueta HIS

Lindsey Barron y Alexander J. R. Bishop

P53 es una proteína globular con dominios distintos y un supresor tumoral clave que funciona a través de la transactivación transcripcional, la represión y las interacciones proteína-proteína. Numerosos estudios han implicado interacciones proteína-proteína entre p53 y una multitud de proteínas celulares con una variedad de funciones conocidas. Debido a estas interacciones y las muchas regulaciones de expresión génica, se han propuesto una multitud de mecanismos potenciales y su relación con la supresión de tumores. Es deseable probar estas interacciones en un entorno in vitro para demostrar que cualquier interacción identificada es directa. Debido a las dificultades asociadas con la purificación de p53 recombinante de longitud completa, muchos estudios han utilizado el dominio de unión al ADN de p53 para probar interacciones directas de proteínas con p53. El dominio de unión al ADN de p53 está estructurado, se pliega de forma independiente y dicta la estabilidad de la proteína de longitud completa. Por lo tanto, es razonable realizar experimentos in vitro con este dominio aislado. Sin embargo, demostramos que si un HIStag está presente en el socio que interactúa cuando se prueba una interacción con p53, esto puede conducir a la detección de una interacción proteína-proteína artificial que aumenta la posibilidad de resultados falsos positivos. Además, la presencia de la etiqueta HIS promueve la agregación y la precipitación del dominio de unión al ADN de p53.