Ingeniería enzimática
Acceso abierto
ISSN: 2329-6674
ISSN: 2329-6674
Monika Van Holsbeeck, Efstathia Tsakali, Evelien Syryn, Guido Aerts, Jan Van Impe e Ilse Van de Voorde
Los cultivos de alta densidad celular muestran un enorme potencial para producir proteínas recombinantes en cantidades que superan con creces la disponibilidad en los recursos naturales. Un ejemplo interesante de una proteína recombinante es una L-arabinosa isomerasa, que es capaz de convertir la D-galactosa en el edulcorante a granel D-tagatosa, bajo en calorías y bajo índice glucémico. Dentro de este estudio, la isomerasa L-arabinosa de Geobacillus stearothermophilus se expresó intracelularmente en Escherichia coli. El medio de cultivo contenía glucosa, extracto de levadura y varios macro y micronutrientes. Se estudió el efecto del caudal de aire sobre el crecimiento de E. coli y la expresión de L-arabinosa isomerasa. Después de 52 horas, una densidad óptica y peso de celda seca de 154 ± 4 y 54,8 ± Se alcanzaron 1,3 g L-1, respectivamente, regulando el caudal de aire entre 0,2 y 30 L min-1. Una actividad correspondiente de L-arabinosa isomerasa de 6,99 ± Se alcanzó 0,46 U mL-1. Una desventaja del cultivo de alta densidad celular es la producción del subproducto ácido acético que puede inhibir el crecimiento. Sin embargo, la concentración de ácido acético se mantuvo lo más baja posible durante la fermentación para evitar los efectos inhibitorios inherentes a este compuesto. Con la L-arabinosa isomerasa producida, un porcentaje de conversión de 37,1 ± Se logró un 1,5%, correspondiente a 94,9 ± 3,7 g L-1 D-tagatosa. Por lo tanto, la implementación de un Cultivo de Alta Densidad Celular condujo a una expresión eficiente de la enzima L-arabinosa isomerasa y la producción de D-tagatosa. También se investigó la estabilidad de almacenamiento de las células durante varios meses a 4°C. Se observó una enzima L-arabinosa isomerasa estable durante al menos 8 meses de almacenamiento a 4 °C.