Wilson Lewis Mandala1
Las respuestas mediadas por células a los estímulos inmunológicos a menudo se localizan en sitios inflamatorios e involucran varios tipos de células. Estas respuestas se pueden caracterizar funcionalmente a nivel de una sola célula sobre la base de los tipos de citocinas expresadas. La capacidad de medir respuestas celulares específicas de antígeno a nivel de una sola célula es una herramienta importante con una amplia gama de aplicaciones potenciales que van desde estudios de patogénesis de enfermedades hasta la evaluación de vacunas. En este estudio se realizaron varios experimentos para establecer las condiciones óptimas para estimular la producción de citoquinas in vitro por parte de linfocitos y monocitos en muestras de sangre recolectadas de participantes adultos sanos de Malawi y las condiciones de tinción óptimas para varias citoquinas y tipos de células. Se evaluaron diferentes métodos y condiciones de estimulación, diferentes tubos de cultivo e incubadoras y diferentes condiciones de marcaje de anticuerpos para establecer las condiciones óptimas.
El uso de PMA más ionomicina produjo células T productoras de citoquinas más altas, mientras que LPS fue un mejor estimulante para los monocitos productores de citoquinas. La estimulación de sangre completa durante cinco horas fue óptima para la detección de citoquinas en células T, mientras que cuatro horas fueron óptimas para monocitos. Se descubrió que BFA es un mejor bloqueador de Golgi que Monensin y que el uso de tubos de polipropileno tipo Falcon de 15 ml mientras estaban estacionarios dio como resultado la detección de la mayor proporción de células productoras de citocinas. Se encontró que las células T eran productoras principalmente de TNF-α, IFN- e IL-2, mientras que los monocitos producían principalmente TNF-α; e IL-6. 2,l de anti-CD3-PerCP, 2,l de anti-CD14-APC y 4,l de anti-citocina-PE dieron los mejores resultados. Los monocitos con mayor producción de citoquinas se detectaron cuando se usaron 2 ml de solución FACS Lysing en comparación con los otros volúmenes. Estas condiciones óptimas son esenciales en la determinación de la proporción de células productoras de citoquinas usando ICS.