Revista de Antivirales y Antirretrovirales
Acceso abierto

abstracto

Las nuevas mutaciones rtM204 en la polimerasa del VHB confieren una susceptibilidad reducida a adefovir y tenofovir

Ke Zhang, Christian Bach, Maria Neumann-Fraune, Yuchen Xia, Bastian Beggel, Rolf Kaiser, Verena Schildgen, Andrea Krämer, Oliver Schildgen y Ulrike Protzer

Antecedentes: El tratamiento de la infección crónica por VHB está limitado por la selección de resistencia. Las mutaciones rtM204I/V en el motivo YMDD de la transcriptasa inversa del VHB son determinantes de resistencia bien documentados contra lamivudina y entecavir, pero no contra adefovir o tenofovir. Se dispone de datos fenotípicos sistemáticos limitados para los dos últimos fármacos.

Métodos: Las mutaciones rtM204 (rtM204A/I/K/L/Q/S/T/V) se introdujeron sistemáticamente en construcciones de HBV de 1,1 veces más de longitud competentes para la replicación bajo el control de un CMV promotor. La capacidad de replicación viral se determinó mediante qPCR selectiva después de la transfección transitoria normalizada. Las susceptibilidades a los fármacos in vitro se evaluaron mediante la determinación de los valores de IC50 de lamividuna, entecavir, adefovir y tenofovir mediante ensayos fenotípicos estandarizados de alto rendimiento. La infectividad se analizó mediante infección de células HepaRG.

Resultados: El fenotipado in vitro mostró que rtM204K confirió un alto nivel de resistencia a adefovir y tenofovir, pero al mismo tiempo perjudicó la capacidad de replicación. Su estado físico no pudo ser restaurado por rtL180M o rtL80I como se describe para rtM204I/V. rtM204L y rtM204Q confirieron una susceptibilidad reducida de bajo nivel a adefovir/tenofovir sin pérdida de la capacidad de replicación. rtM204A/I/S/T redujo sustancialmente la susceptibilidad a cualquiera de los fármacos. Curiosamente, la mutación única rtM204V mostró una susceptibilidad significativamente reducida a ambos fármacos, pero perdió resistencia en combinación con la mutación compensatoria rtL180M. Al afectar el gen S superpuesto, los mutantes rtM204, excepto rtM204L, mostraron una infectividad reducida o disminuida en las células HepaRG.

Conclusiones: Hemos establecido un ensayo fenotípico rentable y rentable e identificado nuevas mutaciones en rtM204 que confieren resistencia cruzada a adefovir y tenofovir in vitro. A pesar de su baja frecuencia en la población viral, su importancia clínica no debe subestimarse debido a la posible selección de mutaciones compensatorias, que pueden restaurar la aptitud viral.