Revista de ciencia y terapia celular
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abstracto

Trasplante no mieloablativo de células madre de médula ósea para la terapia de miodistrofia en ratones mdx

V. M. Mijailov, A.V. Sokolova, V. V. Kravtsova, V. V. Zenin, E. V. Kaminskaya, N.A. Timonina y I.I. Krivoi

Antecedentes: los ratones mdx son un modelo experimental de la enfermedad monogénica humana sin cura, la distrofia muscular de Duchenne (DMD). La esperanza de una cura а está asociada con el uso de la terapia con células madre en particular, pero no exclusivamente. El análisis de múltiples resultados experimentales muestra que el trasplante intramuscular de diferentes tipos de células de diferentes orígenes con propiedades de células madre no puede convertir fibras de músculos estriados mutantes (SMF) en SMF de tipo salvaje. Se concluyó que solo el reemplazo de la médula ósea (BM) mutante por células de BM de tipo salvaje puede convertir SMF mutante en SMF de tipo salvaje. Lamentablemente, la irradiación con rayos X de ratones mdx a una dosis letal de 11, 7 o 5 Gy seguida del trasplante de células BM de ratones C57BL/6 salvajes no aumentó la síntesis de distrofina SMF. El objetivo de este estudio fue analizar la síntesis de distrofina por músculos estriados de ratones mdx después de la irradiación de rayos X con la dosis de 3 Gy seguida de trasplante de células de médula ósea C57BL/6. También investigamos la reparación de la estructura de las fibras musculares del diafragma NMJs. Para confirmar la importancia funcional de los cambios estructurales observados en las UNM, también se llevó a cabo una investigación del potencial de membrana en reposo de las UNM de las fibras musculares del diafragma. Métodos: ratones mdx de 1-1,5 meses de edad fueron irradiados con rayos X a una dosis de 3 Gy. Al día siguiente se inyectaron por vía intravenosa células de MO recién preparadas en una cantidad de (15-20) x 106 células por ratón. Los animales se estudiaron durante 2, 4 y 6 meses después del trasplante. Cada grupo experimental de ratones incluía de 3 a 8 animales. Mus. Se estaban investigando las fibras musculares del cuádriceps femoral y del diafragma con sus uniones nervio-músculo (NMJ). Para el registro de quimerismo, se realizó un estudio especial mediante el trasplante de células BM C57BL/6 positivas para GFP a ratones mdx después de una irradiación de 3 Gy. A lo largo de 6 meses, las células de MO se separaron de los huesos largos y se prepararon frotis. Después de la fijación con carbinol, los frotis se tiñeron con yoduro de propidio y se estudiaron en un microscopio confocal LSM 5 Pascal (Carl Zeiss, Alemania) para contar la parte de células positivas para GFP en relación con la cantidad total de células nucleares. Resultados: Observamos un crecimiento estable de la síntesis de distrofina después de la irradiación no letal de rayos X a una dosis de 3 Gy. La parte de distrofina positiva SMF de M. quadriceps femoris aumentó del 1% al 4% (2 meses), 12% (4 meses) y 27% (6 meses) después del trasplante. El crecimiento de la síntesis de distrofina estuvo acompañado por la disminución del nivel de muerte de SMF, por el aumento de parte de SMF sin núcleo central hasta un 22%, por la acumulación de ramas de MNJ y por la reparación de los potenciales de membrana en reposo. La proporción de células positivas para GFP entre todas las células con núcleo en los frotis de MO de ratones mdx trasplantados con GFP quimérica a los 6 meses después del trasplante fue de 3,3 ± 0,8 % que muestran la naturaleza quimérica de los ratones. Conclusión: el trasplante de células de médula ósea no mieloablativo de ratones mdx después de la irradiación con rayos X de 3 Gy se acompaña de formación de quimerismo, crecimiento estable de la síntesis de distrofina y reparación de la estructura y función de las NMJ.