Revista de glucómica y lipidómica
Acceso abierto

abstracto

Perfiles de N-glucosilación de glicoproteínas de inmunoglobulina Y de pollo expresadas por diferentes vehículos de producción

Sachiko Kondo, Hirokazu Yagi, Yukiko Kamiya, Akihiko Ito, Motoki Kuhara, Ayako Kudoh, Noriko Takahashi y Koichi Kato

La inmunoglobulina Y (IgY), abundante en la yema de huevo, se usa ampliamente como reactivo inmunoquímico y recientemente se ha apreciado como una herramienta terapéutica potencial. La porción Fc de IgY conserva un sitio de N-glicosilación en Asn407, que es estructuralmente equivalente a los sitios de glicosilación conservados de otras clases de Ig en mamíferos. A pesar de tales similitudes, se ha demostrado que las IgY del suero de pollo y la yema de huevo son glicoformas distintas, mejor ejemplificadas por la alta incidencia de oligosacáridos de tipo manosa monoglucosilados, que rara vez se encuentran en las glicoproteínas de mamíferos. Para obtener más información sobre las propiedades de glicosilación de IgY, presentamos un perfil comparativo de N-glucosilación de IgY de pollo recombinante que tienen secuencias de aminoácidos idénticas en sus regiones variables pero se expresan mediante diferentes vehículos de producción. Los oligosacáridos unidos a N escindidos de estas IgY se sometieron a mapeo de HPLC multidimensional junto con análisis de espectrometría de masas. Los perfiles de N-glicosilación de las IgY mostraron patrones obviamente diferentes dependiendo del vehículo de producción. Mientras que la IgY expresada por las células de hibridoma de pollo retuvo los oligosacáridos prematuros de tipo alto en manosa, la IgY expresada por las células CHO experimentó un extenso procesamiento de N-glicano y mostró oligosacáridos antenarios altos. También se observaron diferencias significativas en los niveles de fucosilación central y N-acetilglucosaminilación de bisección y en los tipos de enlace sialilo entre las IgY expresadas por diferentes vehículos. A pesar de tales diferencias, los anticuerpos IgY recombinantes comúnmente expresaron poblaciones considerables de glicoformas monoglucosiladas, lo que sugiere que esta característica de glicosilación está, hasta cierto punto, asociada con la estructura cuaternaria distintiva de IgY-Fc, que, al menos parcialmente, enmascara los N-glucanos Asn407. y los secuestra de los mecanismos de chaperona en el retículo endoplásmico. Sugerimos que el momento y la eficiencia del procesamiento de N-glicanos y la formación de la estructura cuaternaria de IgY son considerablemente diferentes de los de IgE y dependen de los vehículos utilizados para la producción de IgY recombinante, lo que da como resultado una incidencia variable de especies monoglucosiladas.