Medicina Interna: Acceso Abierto
Acceso abierto

abstracto

La tipificación molecular mediante PCR-RFLP revela la diversidad del agente micobacteriano ambiental de la úlcera de Buruli en la Costa de Marfil, Costa de Marfil (África occidental).

Quinet Gregoire, Kakou Ngazoa E Solange, Aka Nguetta, Vakou Sabine, Coulibaly Ngolo David, Kouakou Helene, Sylla Aboubacar, Faye-Kette Hortense, Aoussi Serge, Dosso Mireille

La úlcera de Buruli es una enfermedad de la piel desatendida causada por Mycobacterium ulcerans (MU), y afecta a 1000 personas cada año en todo el mundo y particularmente en los países africanos. La erradicación de la úlcera de Buruli es difícil debido a la falta de diagnóstico temprano en las regiones rurales endémicas y al desconocimiento de la enfermedad en el sistema nacional de salud. En los humedales y marismas rurales de África central y occidental, los niños son los más afectados. MU pertenece a las micobacterias productoras de micolactona (MPM) ambientales y presenta una alta diversidad genética de las cepas circulantes. Los diagnósticos se aplicaron por cultivo y detección del genoma por Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). La PCR se convirtió en un método de oro para confirmar muestras clínicas y ambientales para MU. El método MIRU-VNTR y el polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) combinados con marcadores MIRU-VNTR se utilizaron para discriminar micobacterias de diferentes fuentes. El objetivo de este estudio fue investigar la diversidad molecular de diferentes fuentes de micobacterias, del medio ambiente, cepas de cultivo y muestras clínicas mediante el uso combinado de MIRU-VNTRTyping y RFLP. Un total de 26 muestras (agua, sedimento, cepas de micobacterias e hisopo) de sitios endémicos se confirmaron por primera vez mediante tinción IS2404 o Ziehl-Neelsen. Las muestras se analizaron mediante tipificación por PCR para 4 marcadores específicos (MIRU-1, VNTR6, VNTR19, ST-1) y los amplicones se digirieron con endonucleasa de restricción MspI y se separaron mediante electroforesis en gel de agarosa al 3 % para análisis PCR-RFLP. Nuestros resultados mostraron una amplificación diferente por tipificación VNTR-MIRU. Para muestras ambientales se detectó una baja amplificación del 25% para PCR-MIRU-1. Las cepas de cultivo y las muestras clínicas tenían una tasa de amplificación del 35,7 % y el 62,5 %, respectivamente. ST-1 tuvo el marcador mejor amplificado para las cepas de cultivo en un 71,4 %, mientras que las muestras clínicas tienen una buena tasa de amplificación en un 62,5 % para todos los marcadores. Los perfiles de PCR-RFLP de las muestras clínicas fueron idénticos, mientras que las cepas ambientales y de micobacterias mostraron diferentes perfiles de PCR-RFLP. Hemos desarrollado un enfoque sensible a PCR-RFLP, más fácil y económico para confirmar el genotipado de micobacterias no tuberculosas en países endémicos para la detección ambiental. Sugerimos mutación en loci repetidos de la secuencia VNTR-MIRU y la adaptación de micobacterias del medio ambiente al ser humano. Este estudio confirma la circulación de varios genotipos de micobacterias en Costa de Marfil.