Clonación y transgénesis
Acceso abierto

abstracto

Mantenimiento de la metilación de E.coli dcm del promotor de CMV, en contraste con la hipometilación de la secuencia de reconocimiento del factor de transcripción NFkB en células GBM transfectadas

Dock H, Sjögren H-O, Salford LG, Widegren B y Xue Z-T

El citomegalovirus humano (CMV) inmediato temprano El promotor se ha utilizado ampliamente para impulsar la expresión de genes diana en células transgénicas de mamíferos. Se ha demostrado que la metilación del ADN del promotor de CMV es la razón de la reducción de la actividad del promotor y del silenciamiento del gen diana. Hemos establecido un sistema modelo in vitro, en el que las células de cáncer de cerebro humano (glioblastoma multiforme, GBM) se transfectaron con el plásmido pAdTrack-CMV-GFP, aislado de una cepa de E. coli positiva para dcm (dcm+). Encontramos que en dos secuencias CCTGG ubicadas en la posición de -304 a -300 nt y de -497 a -493 nt de la región promotora de CMV, el C interno estaba metilado en todos los clones analizados, es decir, el patrón de metilación de E. coli dcm se mantiene en la región promotora de CMV después de su integración en el genoma humano. Por el contrario, encontramos que los sitios de reconocimiento para el factor de transcripción NFkB y algunos otros factores de transcripción en la región potenciadora del promotor CMV (de -107 a -270 nt) estaban hipometilados. Esto podría explicar por qué el promotor de CMV mantuvo un modo activo, impulsando la expresión de GFP a pesar de la metilación demostrada del promotor de CMV. Notamos que la secuencia CCTGG también está contenida en el motivo de la secuencia de unión del factor de transcripción NFkB. Por lo tanto, hemos estudiado exhaustivamente los factores de transcripción a través de una búsqueda en la base de datos y los elementos de respuesta que contienen secuencias de metilación de dcm CCW (A / T) GG. Se presenta una lista de factores de transcripción y los genes regulados correspondientes.