Revista de métodos de diagnóstico médico
Acceso abierto

abstracto

Las regiones de ADN de baja densidad en el esperma humano aparecen como vacuolas después de la tinción translúcida con azul reactivo 2

Satrou Kaneko, Joji Yoshida y Kiyoshi Takamatsu

El esperma humano a menudo contiene vacuolas y, por lo tanto, es necesario determinar si las vacuolas en la región cromosómica son responsables del deterioro del ADN. Con ese fin, el presente estudio desarrolló una nueva técnica de examen clínico, tinción translúcida, para la visualización de vacuolas. Reactive Blue 2 altamente diluido (RB2, 100 pmol/L) tiñó débilmente la cabeza del espermatozoide para revelar un cuerpo azulado translúcido con manchas sin tono. El contraste de interferencia diferencial mostró las vacuolas como imágenes en relieve sombreado. En el mismo campo de visión, la localización y la forma de las manchas sin tono coincidieron con las imágenes en relieve sombreado.

La tinción doble con RB2 y colorante fluorescente de ADN sugirió que las vacuolas podrían incluir ADN vacante o de baja densidad. Los presentes resultados revelaron problemas importantes en la tecnología de reproducción asistida (ART) clínica, es decir, una variedad de vacuolas estaban involucradas independientemente de la normalidad del contorno o la motilidad. Las características se clasificaron en tres categorías: cero o una vacuola pequeña; múltiples vacuolas esporádicas de varios tamaños; y una gran vacuola. Además, los pasos de procesamiento in vitro, como la centrifugación en gradiente de densidad y el posterior baño, no pudieron aislar los espermatozoides sin vacuolas.

Dado que aún se desconoce si las vacuolas simplemente empujan el ADN hacia el entorno sin dañarlo, o si la región vacía es consecuencia de la degradación del ADN, la tinción translúcida para la visualización simultánea del contorno y las vacuolas constituye un paso importante para citodiagnóstico pre-ART para determinar si la población de espermatozoides es competente para su uso en la ICSI clínica.