Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto

abstracto

Detección a gran escala y análisis cuantitativo de glucopéptidos N específicos del sitio a partir de suero humano en la enfermedad de Alzheimer temprana mediante LC-HCD-PRM-MS

Lingyun Pan1,2, Yu Lin1, Jianhui Zhu1, Jie Zhang1, Zhijing Tan1, David M. Lubman1*

El análisis de glucopéptidos mediante espectrometría de masas puede brindar una oportunidad importante en el descubrimiento de biomarcadores para ayudar en la detección temprana de la enfermedad de Alzheimer (EA). En este trabajo, hemos utilizado un NanoLC-Stepped-HCD-DDAMS/ Plataforma MS y una plataforma NanoLC-Stepped-HCD-PRM-MS para cribado y cuantificación a gran escala de nuevos biomarcadores de N-glucopéptidos para la detección temprana de EA en suero de pacientes. Se recuperaron N-glucopéptidos de 10 µL de suero en pacientes con deterioro cognitivo leve (DCL, una fase prodrómica de la EA) y normales controles, respectivamente, después de la digestión con tripsina, enriquecimiento de glicopéptidos, fraccionamiento y NanoLC-Stepped- Análisis HCD-DDA-MS/MS o NanoLC-Stepped-HCD-PRM-MS. Usando una combinación de Byonic, Byologic y los softwares Skyline, pudimos lograr tanto la identificación como la cuantificación sin etiquetas de sitios específicos N-glucopéptidos entre MCI y controles normales.

El análisis de cuantificación diferencial realizado por Byologic mostró que 29 N-glucopéptidos derivados de 16 glicoproteínas cambiaron significativamente en MCI en comparación con los controles normales. Además, el análisis cuantitativo HCD-PRM-MS de los candidatos de N-glucopéptidos seleccionados confirmaron que EHEGAIYPDN138TTDFQR_HexNAc(4)Hex(5)- Fuc(2)NeuAc(1) de CERU y VCQDCPLLAPLN156DTR_HexNAc(4)Hex(5)NeuAc(2) de AHSG pueden discriminar significativamente DCL de los controles normales. Estos dos glicopéptidos tenían el área debajo del receptor curva característica operativa (AUC) de 0,850 (IC del 95 %, 0,66-1,0) y 0,867 (IC del 95 %, 0,68-1,0), respectivamente (p<0,05). El resultado demuestra que los cambios en el nivel de expresión de los N-glucopéptidos proporcionan potencial biomarcadores séricos para la detección de la EA en un estadio muy temprano.