Revista de Proteómica y Bioinformática
Acceso abierto
ISSN: 0974-276X
ISSN: 0974-276X
Li Liu, Stefanie Boyd, Mehraban Kavoussi, Lee A Bulla Jr. y Duane D Winkler
La toxina Cry1Ab producida por Bacillus thuringiensis se une a un motivo estructural conservado en el módulo de ectodominio 12 (EC12) de BT-R1, un receptor acoplado a proteína cadherina G (GPCR) contenido en la membrana de las células epiteliales del intestino medio del gusano cornudo del tabaco Manduca sexta. La unión de toxinas transmite una señal a las células y activa una vía de transducción de señales de varios pasos, que culmina en la muerte celular. Usando proteínas Cry1Ab y EC12 cromatográficamente purificadas, demostramos la formación directa de un complejo estable entre estas dos proteínas en solución y lo visualizamos en un gel de poliacrilamida nativa. Además, generamos una sonda EC12 fluorescente al convertir el residuo 36 en cisteína para permitir la conjugación mediada por maleimida del tinte fluorescente Alexa-488 a EC12 mediante mutagénesis dirigida al sitio. Además, cambiamos el residuo 44 de EC12 por triptófano, lo que mejoró en gran medida la precisión de la cuantificación y la trazabilidad de las proteínas. Utilizando la sonda EC12 marcada con fluorescencia para ensayos de unión directa y competitiva, pudimos determinar la especificidad de unión en solución. Estos logros facilitarán la identificación y caracterización de las secuencias de interfaz tanto para la toxina Cry1Ab como para BT-R1.