Revista de Antivirales y Antirretrovirales
Acceso abierto
ISSN: 1948-5964
ISSN: 1948-5964
Anju Gulati-Sakhuja y Hsing-Yeh Liu
Clones de ADNc de longitud completa derivados del ARN genómico (gRNA) y ARN subgenómico (sgRNA) del virus del moteado de Calibrachoa (CbMV) se construyeron bajo el control del promotor de ARN T7 y ligado en el plásmido pUC-18. Los transcritos in vitro protegidos y no protegidos, sintetizados a partir del clon pUC-CbMV-FL de ADNc genómico de longitud completa, generaron lesiones locales cloróticas en Chenopodium quinoa inoculado mecánicamente dentro de los 10 a 15 días posteriores a la inoculación. Los viriones de la progenie recuperados de las hojas sintomáticas inoculadas tenían las mismas propiedades morfológicas que los viriones parentales. Estos viriones también reaccionan positivamente con el antisuero CbMV en un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas tipo sándwich de doble anticuerpo (DAS-ELISA) y la proteína de la cubierta viral se detectó mediante transferencia Western. La presencia de cinco marcos de lectura abiertos (ORF) en el genoma de CbMV y la síntesis de las proteínas correspondientes por gRNA y sgRNA se confirmaron mediante transferencia Northern y traducción in vitro. También se determinó el sitio de inicio de la transcripción de tres sgRNA de CbMV. La construcción exitosa de un clon de ADNc infeccioso de longitud completa de CbMV hace posible desarrollar herramientas moleculares que pueden usarse para comprender las funciones genéticas de este virus.