Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Método HPLC para la cuantificación de halofuginona en uréter humano: aplicación Ex-Vivo

Sassi A, Hassairi A, Kallel M, Jaidane M y Saad SAGUEM

Se desarrolló un nuevo método de cromatografía líquida de alta resolución para estudiar la difusión de halofuginona en la pared del uréter. Los extractos de uréter humano se prepararon mediante digestión con tripsina de los tejidos seguida de extracción líquido-líquido usando isopropanol después de precipitar las proteínas. El método utilizó una columna C18 de fase reversa con una fase móvil suministrada a la columna analítica de acuerdo con un programa de gradientes que comenzaba con una composición de acetato de amonio (pH 4,7; 10 mM)-acetonitrilo-trietilamina (70:30:0,2, v/ v/v) y cambios lineales al 90% de acetonitrilo a los 11 min. La extracción líquido-líquido demostró ser selectiva para el HFG y proporcionó una alta tasa de recuperación del 97,7%. El método HPLC se validó con éxito aplicando el novedoso protocolo de validación utilizando el perfil de precisión basado en un nuevo concepto, el de error total. El protocolo V4, con cinco niveles de concentración y 105 ensayos, fue seleccionado según el algoritmo diseñado por el comité SFSTP 2003. Los límites de aceptación se establecieron en ï± 20%, mientras que el riesgo se liquidó en 5%. Se encontró que el método es preciso en un rango de concentración de 0,2 a 10 µg/ml. El límite de detección de HFG fue de 0,06061 µg/ml. Para demostrar la aplicabilidad de este método en la aplicación ex vivo, se aplicó la cuantificación de HFG en la pared para estudiar su distribución a partir de un gel (0,03 % p/p de HFG) en el uréter humano