Técnicas Avanzadas en Biología y Medicina
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abstracto

Métodos de bioensayo de alto rendimiento y HPLC-UV para la determinación de la bioactividad de Atractylodes lancea y su constituyente bioactivo atraciclodina en muestras biológicas: aplicación para el estudio farmacocinético en pacientes con colangiocarcinoma en estadio avanzado

Anurak Cheoymang, Nadda Muhamad, Inthuon Kulama, Kesara Na-Bangchang*

El estudio tuvo como objetivo establecer un método de bioensayo de alto rendimiento para la determinación de la bioactividad total de Atractylodes lancea (AL) en muestras de suero humano. Además, también se desarrolló un método HPLC-UV simple para la determinación de las concentraciones plasmáticas de Atractylodin (ATD), el principal componente bioactivo de AL. Para el método de bioensayo, se utilizó la cepa Staphylococcus aureus (S. aureus) ATCC 25923 como organismo de prueba. La inhibición del crecimiento bacteriano se evaluó usando el ensayo MTT. La curva de calibración se preparó a partir de la curva de respuesta a la concentración en suero (0, 0,39, 0,78, 1,56, 3,13, 2,56 y 50 ng/ µl), que fue lineal con coeficientes de correlación superiores a 0,990. El límite de cuantificación (LOQ) fue de 1,66 µg/ml utilizando muestras de suero de 20 µl. El procedimiento de ensayo de HPLC-UV se desarrolló en base a la cromatografía de fase reversa usando una columna Hypersil Gold C18 y un solvente de elución que consiste en acetonitrilo y agua en una proporción de 70:30 (v:v). La detección UV se fijó a la longitud de onda de 340 nm. La curva de calibración se preparó a partir de la curva de concentración-respuesta en suero (0, 0,39, 0,78, 1,56, 3,13, 2,56 y 50 ng/µl), que fue lineal con coeficientes de correlación (r) mejores que 0,990. El LOQ fue de 2,5 ng/ml utilizando 1 ml de muestra de plasma. Ambos métodos de ensayo fueron análisis cuantitativos específicos, sensibles, precisos y reproducibles de la bioactividad sérica de AL y las concentraciones plasmáticas de ATD. Los métodos se aplicaron con éxito para el estudio farmacocinético de la bioactividad total (actividad anticolangiocarcinoma) del extracto de AL en cinco pacientes con colangiocarcinoma en estadio avanzado.