Revista de cromatografía y técnicas de separación
Acceso abierto

abstracto

Estudio de degradación forzada de anticuerpos monoclonales mediante cromatografía líquida bidimensional

An Y, Verma S, Chen Y, Yu S, Zhang Y, Kelner S, Mengisen S, Richardson D y Chen Z

Los productos de anticuerpos monoclonales (mAb) son extraordinariamente heterogéneos debido a la presencia de una variedad de modificaciones enzimáticas y químicas, como desamidación, isomerización, oxidación, glicosilación, glicación, ciclación terminal, agregación y fragmentación. El estudio de degradación forzada es una práctica común para evaluar las modificaciones potenciales y las vías de degradación de los mAb en condiciones extremas, incluida la exposición a la luz y el pH local extremo. Las muestras degradadas están sujetas a caracterización utilizando una amplia gama de análisis, incluida la cromatografía de intercambio iónico (IEC) para las variantes de carga y la cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) para las variantes de tamaño. En este estudio de prueba de concepto, se aplicó con éxito un enfoque de cromatografía líquida bidimensional (2D-LC) a muestras de degradación forzada de mAb para evaluar la distribución de tamaño en el perfil de carga IEC. Los picos de las variantes de carga en IEC de primera dimensión (1D) se fraccionaron mediante un programa de corte cardíaco, y la función integrada de estacionamiento de picos acomodó cortes 1D de elución posterior cuando los anteriores todavía estaban bajo análisis de segunda dimensión (2D). Por lo tanto, para una sola inyección de IEC, todas las fracciones de IEC fueron adquiridas por el análisis 2D para SEC. Este estudio demostró que 2D SEC era compatible con 1D IEC para análisis 2D-LC. La sensibilidad del método fue suficiente para determinar los agregados y fragmentos en cada corte IEC individual. Los agregados y fragmentos totales calculados en las muestras de mAb-1 estresadas fueron comparables a los detectados por SEC unidimensional. Lo que es más importante, el enfoque 2D IEC-SEC fue capaz de unir las variantes de carga y tamaño de mAb en tiempo real y de manera eficiente. Se observó que los agregados estaban enriquecidos en la región más básica del perfil de carga IEC, especialmente en las muestras altamente degradadas. Esta es la primera aplicación IEC-SEC 2D-LC para el análisis de anticuerpos intactos según los autores. conocimiento.