Revista de Toxicología Clínica
Acceso abierto

abstracto

Inducción experimental de la diferenciación miogénica en células madre mesenquimales de médula ósea de conejo utilizando diferentes concentraciones de 5-azacitidina

Wenyong Fei, Yao Zhang, Shichao Cao, Mingsheng Liu, Jiyang Tan, Xuanqi Wang, Bin Xie y Jingcheng Wang

Propósito: investigar la proliferación y la capacidad de diferenciación miogénica de las células madre mesenquimales de médula ósea de conejo ( BMSCS) en presencia de diferentes concentraciones de 5-azacitidina (5-Aza).

Método: BMSCS de conejos blancos macho adultos de Nueva Zelanda se expandieron y cultivaron in vitro. Las células se indujeron con 0, 5, 10, 20 y 40 µmol/l de 5-Aza durante 24 horas, y estos grupos se denominaron grupos A, B, C, D y E. El grupo A sirvió como grupo de control. , y los grupos B, C, D y E fueron los grupos experimentales. La absorbancia de las células a 570 nm se midió usando el método MTT, que se usa comúnmente para evaluar la viabilidad celular. Los días 1, 3, 5, 7 y 9 después de la inducción, se observaron la proliferación y los cambios morfológicos de BMSCS utilizando un microscopio de luz invertida. El día 9 de cultivo, digerimos y recolectamos las células y preparamos portaobjetos de las células. La expresión de actina se evaluó por inmunocitoquímica y el porcentaje de expresión de actina se determinó mediante un análisis semicuantitativo de fluorescencia. Se utilizó RT-PCR cuantitativa para detectar la expresión de ARNm de troponina y miosina.

Resultados: Los resultados de la citometría de flujo mostraron que los marcadores de superficie CD34, CD44 y CD90 se expresaron en porcentajes de 2,52%, 94,6% y 92,8%, respectivamente. El ensayo de bromuro de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2-tetrazolio (MTT) reveló que la viabilidad celular era significativamente menor en el grupo E que en el grupo A (p <0,001). El día 9, los cambios de morfología celular observados en el grupo C fueron los más evidentes. La expresión de actina se detectó en los grupos A, B y C mediante inmunohistoquímica, y la fluorescencia semicuantitativa mostró que el grupo C exhibió una diferenciación miogénica significativamente mayor en BMSCS que el grupo A (p = 0,034). En el día 9 después de la inducción, los niveles de expresión de ARNm de troponina y miosina fueron más altos en el grupo C que en el grupo A (p = 0,04 y p <0,001, respectivamente), como lo demuestra la PCR cuantitativa en tiempo real.

Conclusión: Diferentes concentraciones de 5-Aza ejercen diferentes efectos sobre la proliferación y diferenciación miogénica de BMSCS de quinta generación. Además, 10 µmol/L de 5-Aza promovió significativamente la diferenciación miogénica, mientras que 40 µmol/L de 5-Aza ejerció cierto efecto tóxico sobre la proliferación de BMSC.