Revista de Investigación y Desarrollo
Acceso abierto
ISSN: 2311-3278
ISSN: 2311-3278
Ferhat Djoudi
La tuberculosis es una enfermedad infecciosa muy antigua. El agente etiológico de esta patología, Mycobacterium tuberculosis, fue descubierto en el siglo XIX por Robert Koch. El bacilo tuberculoso infectó a los primeros homínidos y coevolucionó con Theme. Esta infección suele comenzar con la inhalación de gotitas contaminadas emitidas por los individuos enfermos, con una dosis infectiva mínima muy baja, que oscila entre 1 y 10 bacilos. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), casi un tercio de la población mundial está infectada con el bacilo tuberculoso. En 2015, el 87 % de los casos nuevos ocurrieron en 30 países con alta carga de TB. Seis países representaron el 60% de los nuevos casos: India, Indonesia, China, Nigeria, Pakistán y Sudáfrica. La incidencia de esta enfermedad ha descendido una media del 1,5% anual desde el año 2000 y la evoluciónde su diagnóstico y tratamiento salvó 49 millones de vidas entre 2000 y 2015. El control de la enfermedad comienza con la identificación de M. tuberculosis y el desarrollo de herramientas de detección, incluidas las radiografías y la prueba de la tuberculina. Objetivo del Estudio El objetivo de este estudio es verificar la contribución de BACTEC MGIT 960 en el diagnóstico de tuberculosis pulmonar, en comparación con el cultivo clásico en medio LJ, en la unidad de Tuberculosis y Micobacterias del Instituto Pasteur de Argelia. Material y métodos: entorno y consideraciones éticas: el laboratorio de tuberculosis y micobacterias del Instituto Pasteur de Argel (IPA) ocupa un lugar clave en la lucha contra la tuberculosisen Argelia, además de ser el laboratorio nacional de referencia para el diagnóstico y testeo de drogas antituberculosas, está implicado en la supervisión, seguimiento y reporte de resultados de toda la red de laboratorios nacionales involucrados en el diagnóstico de la tuberculosis. También es un laboratorio supranacional que coopera con la OMS para la región de África. Se obtuvieron los consentimientos orales de todos los pacientes antes de la recolección de la muestra y se tuvieron en cuenta las consideraciones éticas durante todos los pasos del estudio. Los datos del paciente y los resultados se mantuvieron en una base de datos segura. Materiales y procedimientos Se incluyeron en el estudio tres tipos de muestras pulmonares: expectoración, sondaje gástrico y aspiración bronquial. La recolección de estas muestras se realizó en escupideras limpias. Cada muestra enviada al laboratorio se acompañó de ficha informativa del paciente. Las muestras se almacenaron a +4°C y se realizó directamente la tinción con ZN. Muestras polimicrobianas sometidas a descontaminación previa antes de ser cultivadas, y se utilizó la técnica de descontaminación de Petroff, sin neutralización. Para cada muestra se inocularon 2 tubos de Lowenstein-Jensen. Antes de inocular los tubos MGIT, las muestras se procesaron utilizando el kit BBLMycoPrep que contiene una mezcla de N-acetil-L-cisteína e hidróxido de sodio al 2% (NALC-NaOH), siguiendo el Protocolo de Kubica. Los tubos positivos en BACTEC MGIT 960 se inocularon sistemáticamente en medios Lowenstein-Jensen y se realizó tinción de Ziehl-Neelsen para cada tubo. Finalmente, se aplicó una identificación rápida con TBC ID inmunocromatográfica. Las muestras se almacenaron a +4°C y se realizó directamente la tinción con ZN. Muestras polimicrobianas sometidas a descontaminación previa antes de ser cultivadas, y se utilizó la técnica de descontaminación de Petroff, sin neutralización. Para cada muestra se inocularon 2 tubos de Lowenstein-Jensen. Antes de inocular los tubos MGIT, las muestras se procesaron utilizando el kit BBLMycoPrep que contiene una mezcla de N-acetil-L-cisteína e hidróxido de sodio al 2% (NALC-NaOH), siguiendo el Protocolo de Kubica. Los tubos positivos en BACTEC MGIT 960 se inocularon sistemáticamente en medios Lowenstein-Jensen y se realizó tinción de Ziehl-Neelsen para cada tubo. Finalmente, se aplicó una identificación rápida con TBC ID inmunocromatográfica. Las muestras se almacenaron a +4°C y se realizó directamente la tinción con ZN. Muestras polimicrobianas sometidas a descontaminación previa antes de ser cultivadas, y se utilizó la técnica de descontaminación de Petroff, sin neutralización. Para cada muestra se inocularon 2 tubos de Lowenstein-Jensen. Antes de inocular los tubos MGIT, las muestras se procesaron utilizando el kit BBLMycoPrep que contiene una mezcla de N-acetil-L-cisteína e hidróxido de sodio al 2% (NALC-NaOH), siguiendo el Protocolo de Kubica. Los tubos positivos en BACTEC MGIT 960 se inocularon sistemáticamente en medios Lowenstein-Jensen y se realizó tinción de Ziehl-Neelsen para cada tubo. Finalmente, se aplicó una identificación rápida con TBC ID inmunocromatográfica. Muestras polimicrobianas sometidas a descontaminación previa antes de ser cultivadas, y se utilizó la técnica de descontaminación de Petroff, sin neutralización. Para cada muestra se inocularon 2 tubos de Lowenstein-Jensen. Antes de inocular los tubos MGIT, las muestras se procesaron utilizando el kit BBLMycoPrep que contiene una mezcla de N-acetil-L-cisteína e hidróxido de sodio al 2% (NALC-NaOH), siguiendo el Protocolo de Kubica. Los tubos positivos en BACTEC MGIT 960 se inocularon sistemáticamente en medios Lowenstein-Jensen y se realizó tinción de Ziehl-Neelsen para cada tubo. Finalmente, se aplicó una identificación rápida con TBC ID inmunocromatográfica. Muestras polimicrobianas sometidas a descontaminación previa antes de ser cultivadas, y se utilizó la técnica de descontaminación de Petroff, sin neutralización. Para cada muestra se inocularon 2 tubos de Lowenstein-Jensen. Antes de inocular los tubos MGIT, las muestras se procesaron utilizando el kit BBLMycoPrep que contiene una mezcla de N-acetil-L-cisteína e hidróxido de sodio al 2% (NALC-NaOH), siguiendo el Protocolo de Kubica. Los tubos positivos en BACTEC MGIT 960 se inocularon sistemáticamente en medios Lowenstein-Jensen y se realizó tinción de Ziehl-Neelsen para cada tubo. Finalmente, se aplicó una identificación rápida con TBC ID inmunocromatográfica. las muestras se procesaron utilizando el kit BBLMycoPrep que contiene una mezcla de N-acetil-L-cisteína e hidróxido de sodio al 2% (NALC-NaOH), siguiendo el Protocolo de Kubica. Los tubos positivos en BACTEC MGIT 960 se inocularon sistemáticamente en medios Lowenstein-Jensen y se realizó tinción de Ziehl-Neelsen para cada tubo. Finalmente, se aplicó una identificación rápida con TBC ID inmunocromatográfica. las muestras se procesaron utilizando el kit BBLMycoPrep que contiene una mezcla de N-acetil-L-cisteína e hidróxido de sodio al 2% (NALC-NaOH), siguiendo el Protocolo de Kubica. Los tubos positivos en BACTEC MGIT 960 se inocularon sistemáticamente en medios Lowenstein-Jensen y se realizó tinción de Ziehl-Neelsen para cada tubo. Finalmente, se aplicó una identificación rápida con TBC ID inmunocromatográfica. Antibiograma en medio sólido, método de las proporciones: Las colonias (alrededor de 1 mg) se colocan en un matraz de 50 ml que contiene perlas de vidrio, se agita durante 10 min para disociar las colonias. De la suspensión inicial y dilución 10-2, dos tubos LJ que contienen, cada uno, uno de los fármacos antituberculosos de primera línea: Isoniazida (0,2 mg/ml), estreptomicina (4 mg/ml), rifampicina (40 mg/ml) y etambutol (2 mg/ml), fueron inoculados. Para cada muestra, se inocularon dos tubos LJ individuales (sin antibióticos) como controles. Se inocularon con la suspensión inicial tubos de LJ que contenían medios específicos (TCH, PNB y PAS), para confirmación de la identificación. La primera verificación de los tubos, después de la incubación a 37°C, se realizó el día 28, una segunda y última lectura el día 42. Después de contar el número de colonias en ambos tipos de tubos, una relación de proporción entre el número de colonias con antibióticos y el número de colonias en los tubos de control se expresa como un porcentaje. Por debajo del 1% de “proporción crítica”, la cepa es sensible, por encima o igual al 1%, se consideró resistente. Los aislamientos MDRs fueron sometidos a un segundo antibiograma, frente a Ofloxacina y Kanamicina, para verificar la existencia de aislamientos XDR. Antibiograma en medio líquido, BACTEC MGIT 960: El primer día de la positividad de un tubo de cultivo MGIT se considera como día “D-0”. Los inóculos para este antibiograma deben prepararse entre “D-1” y “D-5”. Se rotularon cinco tubos por cada aislado a ensayar, un tubo de control de crecimiento y 4 tubos que contenían los antibióticos; estreptomicina (1 μg/ml), isoniazida (0,1 μg/ml), rifampicina (1 μg/ml), etambutol (5 μg/ml). La lectura se realiza automáticamente cada 60 minutos, la prueba de sensibilidad se registra entre 5 a 12 días y el resultado se obtiene en forma de informe impreso. Análisis estadístico: Se realizó análisis estadístico para calcular frecuencias y diferencias significativas, utilizando la prueba de ANOVA de una vía o de Kruskall-Wallis, cuando correspondía, o mediante la prueba de chi-cuadrado y exacta de Fisher, respectivamente. La asociación entre las variables en consideración se evaluó mediante tablas de contingencia y todos los valores de p informados fueron de dos colas. p < 0,05 se consideró significativo. Resultados y Discusión: Durante las últimas décadas ha habido un aumento significativo en la incidencia de infecciones de TB. Es obvio que el aumento de los factores favorables a esta enfermedad, así como la aparición de cepas resistentes a múltiples fármacos, son problemas de salud de gran importancia para la comunidad internacional, ya sea en países desarrollados o en vías de desarrollo. Esta alarmante situación ha llevado a la investigación y desarrollo de medios de detección y tratamiento más rápidos y eficientes, con el objetivo de reducir las tasas de mortalidad. La carrera contra esta enfermedad se justifica, entre otras cosas, por el hecho de que es la más mortal, por delante del SIDA en 2014. Algunos estudios han demostrado que la combinación del medio líquido y sólido es un principio esencial para el diagnóstico de tuberculosis. Sin embargo, en la mayoría de los laboratorios africanos, esta combinación rara vez está disponible debido a los altos costos de los medios líquidos. Como resultado, solo se utiliza el medio sólido (LJ) para el cultivo y las pruebas de susceptibilidad. Nota: Este trabajo se presentó parcialmente en el 21.er Congreso Europeo de Biotecnología los días 11 y 12 de octubre de 2018 en Moscú, Rusia.