Revista de Síndromes Genéticos y Terapia Génica
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abstracto

Erradicación de células de cáncer de ovario humano mediante la expresión transgénica de DNASE1, DNASE1L3, DNASE2 y DFFB recombinantes controladas por < Promotor de i>EGFR: ¿nueva estrategia para la terapia dirigida contra el cáncer?

Marek Malecki, Jessica Dahlke, Melissa Haig, Lynn Wohlwend y Raf Malecki

Introducción: El cáncer de ovario es el más mortal entre todos los cánceres ginecológicos. Los pacientes que se someten a terapias sistémicas de cánceres de ovario avanzados sufren terribles efectos secundarios. Los sobrevivientes de cáncer y su descendencia sufren las consecuencias iatrogénicas de las terapias sistémicas: mutaciones genéticas. El objetivo final de nuestro trabajo es el desarrollo de terapias que eliminen selectiva y completamente las células cancerosas, pero que no dañen las células sanas. Una consideración importante para lograr este objetivo es el hecho de que las células de cáncer de ovario sobreexpresan EGFR o sus mutantes, lo que se convierte en el factor que las discrimina de las células sanas, un facilitador potencial de la terapia personalizada.

Objetivo específico: El objetivo específico de este proyecto era triple: (1) bioingeniería de genes suicidas’ portadores de vectores guiados por anticuerpos sintéticos para EGFRvIII y EGFR; (2) diseñar genéticamente construcciones de ADN para la ADNSE1, la ADNSE1L3, la ADNSE2 y la DFFB recombinantes humanas controladas por el promotor de EGFR; (3) para erradicar de forma selectiva las células de cáncer de ovario mediante el direccionamiento intranuclear de las ADNasas recombinantes expresadas transgénicamente.

Métodos: Se seleccionaron anticuerpos sintéticos para EGFR y EGFRvIII de la biblioteca humana y se usaron para bioingeniería de transgenes guiados por etiquetas biológicas’ vectores Las secuencias de codificación para DNASE1, DNASE1L3, DNASE2, DFFB humanas controladas por el promotor EGFR se amplificaron a partir del ADNc humano y se modificaron genéticamente en las construcciones de plásmidos que también codifican las fusiones con NLS y GFP. Los vectores que portaban transgenes para las ADNasas se administraron in vitro en células de cáncer de ovario humano de ascitis y cultivos.

Resultados: los vectores guiados por anticuerpos sintéticos administraron los transgenes para las ADNas recombinantes de manera eficiente en las células de cáncer de ovario. La expresión transgénica y la orientación nuclear de las ADNasas en esas células dieron como resultado la destrucción de sus genomas y condujeron a su muerte, como se validó mediante el etiquetado con las etiquetas de muerte molecular. En células sanas, que no sobreexpresaron EGFR, no se registraron cambios.

Conclusión: La expresión dirigida de DNASE1, DNASE1L3, DNASE2, DFFB recombinantes en los cánceres de ovario in vitro resultó en su erradicación completa, pero no tuvo efectos sobre las células sanas. Esta novedosa estrategia terapéutica tiene el potencial de simplificarla en ensayos in vivo, como terapia dirigida y personalizada para el cáncer de ovario y otros tipos de cáncer.